CTLA-4基因的多态性与自身免疫性甲状腺病的相关性研究
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时间：2011年3月15日 14:16
【摘要】 目的 探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4，CTLA-4）基因第一外显子49位点A/G多态性与自身免疫性甲状腺病（AITDs）的关系。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段多态性（PCR-PFLP）技术分析60例自身免疫性甲状腺病患者，其中Graves病（GD）36例，桥本甲状腺炎（HT）24例，87例健康对照的CTLA-4基因第一外显子的49位点基因型。结果 GD组患者CTLA-4基因49位点A/G基因型及等位基因频率与对照组比较，差异有统计学意义（P＜ 0.05）；HT组与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；GD、HT组按性别分层分析后发现CTLA-4基因49等位基因在不同性别的分布差异均无统计学意义。结论 CTLA-4基因49位点等位基因与GD显著相关；GD、HT患者49位点A/G等位基因的分布与性别无关。代发表职称论文
【关键词】 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4；自身免疫性甲状腺病；基因；多态性
Abstract: Objective To investigate the association of gene polymorphism of cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 (CTLA-4) with autoimmune thyroid diseases. Methods The A/G transition polymorphism at position 49 (exon 1, codon 17) of the CTLA-4 gene was determined by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method in 60 autoimmune thyroid diseases patients which included 36 Graves′ disease (GD) patients and 24 Hashimoto's thyroiditis (HT) patients, as well as 87 control subjects. Results In the exon 1(49) of CTLA-4 gene, the frequencies of genotypes and A/G allele in GD patients was significantly increased compared with control subjects (P＜0.05). When the patients was subgrouped by sex, the frequencies of genotypes were not significant different (P＞0.05). Conclusion The polymorphism of CTLA-4 gene (exon 1 condon 17 position 49) confers susceptibility to GD. This association is independent of sex.
Key words: autoimmune thyroid diseases; cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4; gene；polymorphism
自身免疫性甲状腺疾病（autoimmune thyroid disease，AITDs）主要包括Graves病（Graves’disease, GD）和桥本氏甲状腺炎（Hashimoto’s thyroiditis, HT），是一组T淋巴细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病。AITDs是一种多发病，其发病率在1%～2%，可影响全身多个系统且治疗难度大，其发生是遗传和环境因素相互作用的结果。虽然GD 和HT临床表现不同，但都发生体液或细胞免疫介导的甲状腺上皮细胞破坏。CTLA-4基因（位于2q 33）是其易感基因中的一个［1-2］。最近有研究表明：AITDs与CTLA-4基因第一外显子49位点A/G多态性有关，但各家报道不尽相同，说明不同人种的易感基因及其对疾病的作用存在一定差异。本文通过对CTLA-4基因第一外显子49位点A/G多态性研究，探讨CTLA-4基因第一外显子49位点A/G多态性与AITDs的相关性。
1 材料与方法
1.1 研究对象代发表职称论文
63例（回族2例）AITDs患者均为宁夏医科大学附属医院内分泌科住院部病人，男21例，女42例，平均年龄（44.47±11.81）岁，其中GD 患者45例（男16例，女29例），HT患者18例（男5例，女13例）。诊断均根据临床症状、体征及甲状腺功能检测确诊，临床有甲亢表现排除1型糖尿病、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病。87例（回族23例）正常对照男15例，女72例，平均年龄（38.93±11.70）岁，来自我院门诊体检人员，均无甲状腺疾病及其它自身免疫性疾病的家族史。
1.2 主要试剂与仪器
BbvΙ限制性内切酶由纽英伦生物技术（北京）有限公司提供，Taq DNA聚合酶由中国大连TaKaRa公司提供；MasterCycler PCR扩增仪（Eppendorf，德国），Gel Doc2000凝胶图像分析系统（BIO-RAD，美国）。
1.3 实验方法
1.3.1 提取外周血白细胞基因组DNA
取外周血5mL（EDTA-2Na抗凝），低温冷冻溶解红细胞后，用全血基因组DNA提取试剂盒提取外周血白细胞基因组DNA。Nanodrop核酸蛋白测定仪测定DNA的浓度及纯度，-20℃储存备用。
1.3.2 PCR扩增CTLA-4基因外显子1
以基因组DNA为模板，用PCR扩增CTLA-4基因外显子1（包含第49位多态性位点）。引物序列：上游引物为 5’-GCTCTACTTCCTGAAGACCT-3’，下游引物为5’-AGTCTCACTCACCTTTGCAG-3’，引物由上海生工合成。PCR 反应体系25μL：基因组DNA 100 ng，灭菌去离子水10μL，10×buffer 5μL，2mmol·L－1 dNTPs 4μL，20μmol·L－1引物各0.5μL，Taq酶（5U·μL－1）。94℃预变性5min；94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸 40s，共30个循环；72℃延伸5min，最后4℃保存。
1.3.3 CTLA-4基因外显子49位点A/G多态性分析 代发表职称论文
用限制性内切酶BbvΙ对PCR扩增产物进行酶切：PCR扩增产物8.0μL，去离子水4.5μL，10×buffer 1.5μL，BbvΙ 2U，总体积15.0μL。37℃酶切过夜。酶切产物用12%非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，EB染色进行基因型鉴定。
1.4 统计学方法
研究样本的群体代表性用Hardy-Weinberg平衡检验确认，计量资料以均数±标准差表示，组间基因型频率、等位基因频率的比较用χ2检验，数据处理采用SPSS 11.0软件。
2 结果
2.1 CTLA-4基因第一外显子49位点基因型
含49A/G位点的PCR扩增产物作6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，扩增片段长度为162bp，49位点基因型为G/G时，162bp的PCR产物被消化为88bp和74bp 2个片段；基因型为A/A时则不能被酶切，电泳后只有1条162bp片段；基因型为A/G型时，则有3条片段，分别是74bp、88bp和162bp，见图1。
2.2 CTLA-4基因49位点A/G基因型及等位基因频率
经Hardy-Weinberg平衡法检验各组基因频率，等位基因的分布具群体代表性（AITDs组χ2=1.24，P=0.538；对照组 χ2=5.78，P=0.06）。结果显示，GD组CTLA-4基因49位点A/G基因型及等位基因频率与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；HT组与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1、2。表1 AITDs组与正常对照组CTLA-4基因49位点A/G基因型的比较（略）表2 AITDs组与正常对照组CTLA-4基因49位点A/G等位基因频率的比较（略）
2.3 不同性别AITDs患者CTLA-4基因型 代发表职称论文
不同性别CTLA-4基因49位点A/G基因型、等位基因频率，χ2检验结果显示P值均大于0.05，无统计学意义，结果见表3。表3 AITDs按性别分组后CTLA-4基因第一外显子49位点A/G基因型及等位基因频率（略）
3 讨论
CTLA-4属于细胞表面共刺激分子,与CD28属于同一家族,都是调节B7细胞表面分子,与B7分子结合可抑制T细胞增殖、活化，诱导T细胞耐受,维持机体细胞/体液免疫平衡。它表达于CD4+、CD25+调节性T细胞表面,在自身免疫炎症状态下,磷酸化的CTLA-4可以降低T细胞受体信号转导,控制自身反应性T细胞,抑制T细胞的活化及克隆［4］。人类CTLA-4基因定位于2q 33，在基因组中仅有一个拷贝。CTLA-4基因有3个多态性位点：启动子318位点C/T多态性；外显子1第17密码子49位点A/G多态性，外显子4 的3'非翻译区642位点的二核苷酸（AT）n可变重复序列。体外功能研究显示，外显子1的A49G位点和启动子区C-318T位点能显著影响CTLA- 4基因的转录活性和mRNA的表达水平［5-6］，导致个体自身免疫疾病的易患倾向不同。
AITDs是由T细胞介导的自身免疫过程，发病受多种易感基因和环境因素控制。许多研究均证明，CTLA-4基因存在多态性，与AITDs等自身免疫性疾病密切相关，国内外有GD病与CTLA-4基因多态性之间关系研究的报道，但所显示的结果并不完全一致。Yanagawa等［7］报道美国白种GD病人与 CTLA-4多态性有较少的相关性，而在意大利、日本、韩国人群中启动子多态性与AITD显著相关［8-10］。国内文献报道中，吕玲［11］等研究发现GD发病与CTLA-4第3外显子的3'非翻译区二核苷酸(AT)重复序列106bp和CTLA-4外显子1(49)A/G 等位基因多态性相关,但与CTLA-4(318)C/T多态性有较少的相关性。王巧宏［12］，周文旭［13］，张勤［14］等也均支持49位点A/G等位基因是AITD的危险因素之一。本研究采用PCR-RFLP技术，对CTLA-4基因第1外显子49位点基因多态性与AITDs的相关性进行分析，结果发现GD组外显子49位点基因型频率、等位基因频率与对照组相比差异有统计学意义，这与国内大部分研究结果一致。
由于GD发病女性明显高于男性，Donner等［15］研究结果认为GD患者与正常对照的等位基因携带水平有着明显的性别差异（P＜0.05）；我国青岛的研究也进行了性别的比较［16］，未发现统计学意义。我们在AITDs患者中，比较不同性别CTLA-4基因位点基因型、等位基因频率,经χ2检验结果显示P值均大于0.05, 无统计学意义，与Donner研究结果不一致，说明AITDs发病与等位基因49A/G在所研究的群体中可能不存在性别关联。
总之，本研究显示CTLA-4基因第一外显子49A/G多态性与AITDs有相关性，但与性别无关。可能是因为研究对象的种族差异造成的，CTLA-4各等位基因的分布频率在不同种族、不同民族，甚至在一个国家的不同地域是有很大差异的，因此与疾病的易感有关联的CTLA-4基因型也可能受到这一差异的影响。我们在后续研究中，需进一步增加研究病例数，同时，还需在基因、免疫、蛋白的表达和功能等方面进行更深入研究，以揭示此位点突变对AITDs的作用和致病机理。
代发表职称论文
【参考文献】
［1］Simmonds MJ,Gough SC. Unravelling the genetic complexity of autoimmune thyroid disease:HLA,CTLA-4 and beyond［J］. Clin Exp Immunol,2004,136(1):1-10.
［2］Einarsdottiv E,Soderstrom I,Lofgren Burstrom A, et al. The CTLA-4 region as a general autoimmunity factor:an external pedigree provide evidence for synergy with the HLA locus in the etiology of type 1 diabetes mellitus, Hashimoto′s thyroiditis and Graves′disease ［J］ . Eur J Hum Genet,2003,11(1):81-84.
［3］杨建军，张毓洪. CTLA-4基因的多态性与宁夏儿童1型糖尿病的相关性研究［J］.宁夏医学院学报，2006，28（5）：374-378.
［4］Eagar TN, Karandikar NJ,Bluestone JA, et al. The role of CTLA-4 in induction and maintenance of peripheral T cell tolerance［J］. Eur J Immunol, 2002,32(4):972-981.
［5］Ligers A, Teleshova N, Masterman T, et al. CTLA-4 gene expression is influenced by promoter and exon 1 polymorphisms［J］. Genes Immun, 2001, 2(3):145-152.
［6］Wang XB, Zhao X, Giscombe R, et al. A CTLA-4 gene polymorphism at position 318 in the promoter region affects the expression of protein［J］. Genes Immun,2002,3(4):233-234.
［7］Yanagawa T,Hidaka Y,Guimaraes V, et al .CTLA-4 gene polymorphism associated with Graves'disease in a Caucasian population ［J］.Clin Endocrinol Metab,1995,80(1):41-45.
［8］Antonio P, Gabriele G, Andrea G, et al. CT 60 single nucleotide polymorphisms of the cytotoxic T-lymphocyte associated antigen-4 gene region is associated with Graves′Disease in an Italian population［J］. Thyroid, 2005,15(3):232-238.
［9］Tomoyose T, Komiya I, Takara M, et al. Cytotoxic T lymphocyte antigen 4 gene polymorphisms and human T cell lymphotrophic virus1 infection: their associations with Hashimoto's thyroiditis in Japanese patients［J］. Thyroid, 2002,12(8):673-677.
［10］Park YJ, Chung HK, Park DJ, et al. Polymorphism in the promoter and exon 1 of the cytotoxic T lymphocyte antigen-4 gene associated with autoimmune thyroid disease in Koreans［J］. Thyroid, 2000,10(6): 453-459.
［11］陈悦.CTLA-4基因多态性与不同种族Graves'病患者的相关性［J］.中国优生与遗传杂志,2008,16(6):13-15.
［12］王巧宏，任跃忠.中国人CTLA-4基因外显子1多态性与Graves病的相关性［J］.中华内分泌代谢杂志，2003，19（4）：297-299.
［13］周文旭,施秉银,王惠芳,等. 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4基因多态性与自身免疫性甲状腺病的相关性［J］. 西安交通大学学报：医学版,2003,24 (2):170-173.
代发表职称论文
［14］张勤,李梅,杜亦陶,等. Graves眼病与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4基因启动子和外显子1多态性的相关性研究［J］. 中华内科杂志, 2004, 43(3): 214-215.
［15］Donner H, Rm H, Walfish PG, et al. CTLA-4 Alanine-17 confers genetic susceptibility to Graves'disease and to type I diabetes mellitus［J］. J Clin Endocri Metab,1997,82(1):143-146.
［16］王斐，马瑞欣.自身免疫性甲状腺病CTLA-4基因外显子1A/G49多态性研究［J］.免疫学杂志，2001,17（2）：116-118.
【关键词】 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4；自身免疫性甲状腺病；基因；多态性
Abstract: Objective To investigate the association of gene polymorphism of cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 (CTLA-4) with autoimmune thyroid diseases. Methods The A/G transition polymorphism at position 49 (exon 1, codon 17) of the CTLA-4 gene was determined by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method in 60 autoimmune thyroid diseases patients which included 36 Graves′ disease (GD) patients and 24 Hashimoto's thyroiditis (HT) patients, as well as 87 control subjects. Results In the exon 1(49) of CTLA-4 gene, the frequencies of genotypes and A/G allele in GD patients was significantly increased compared with control subjects (P＜0.05). When the patients was subgrouped by sex, the frequencies of genotypes were not significant different (P＞0.05). Conclusion The polymorphism of CTLA-4 gene (exon 1 condon 17 position 49) confers susceptibility to GD. This association is independent of sex.
Key words: autoimmune thyroid diseases; cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4; gene；polymorphism
自身免疫性甲状腺疾病（autoimmune thyroid disease，AITDs）主要包括Graves病（Graves’disease, GD）和桥本氏甲状腺炎（Hashimoto’s thyroiditis, HT），是一组T淋巴细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病。AITDs是一种多发病，其发病率在1%～2%，可影响全身多个系统且治疗难度大，其发生是遗传和环境因素相互作用的结果。虽然GD 和HT临床表现不同，但都发生体液或细胞免疫介导的甲状腺上皮细胞破坏。CTLA-4基因（位于2q 33）是其易感基因中的一个［1-2］。最近有研究表明：AITDs与CTLA-4基因第一外显子49位点A/G多态性有关，但各家报道不尽相同，说明不同人种的易感基因及其对疾病的作用存在一定差异。本文通过对CTLA-4基因第一外显子49位点A/G多态性研究，探讨CTLA-4基因第一外显子49位点A/G多态性与AITDs的相关性。
1 材料与方法
1.1 研究对象代发表职称论文
63例（回族2例）AITDs患者均为宁夏医科大学附属医院内分泌科住院部病人，男21例，女42例，平均年龄（44.47±11.81）岁，其中GD 患者45例（男16例，女29例），HT患者18例（男5例，女13例）。诊断均根据临床症状、体征及甲状腺功能检测确诊，临床有甲亢表现排除1型糖尿病、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病。87例（回族23例）正常对照男15例，女72例，平均年龄（38.93±11.70）岁，来自我院门诊体检人员，均无甲状腺疾病及其它自身免疫性疾病的家族史。
1.2 主要试剂与仪器
BbvΙ限制性内切酶由纽英伦生物技术（北京）有限公司提供，Taq DNA聚合酶由中国大连TaKaRa公司提供；MasterCycler PCR扩增仪（Eppendorf，德国），Gel Doc2000凝胶图像分析系统（BIO-RAD，美国）。
1.3 实验方法
1.3.1 提取外周血白细胞基因组DNA
取外周血5mL（EDTA-2Na抗凝），低温冷冻溶解红细胞后，用全血基因组DNA提取试剂盒提取外周血白细胞基因组DNA。Nanodrop核酸蛋白测定仪测定DNA的浓度及纯度，-20℃储存备用。
1.3.2 PCR扩增CTLA-4基因外显子1
以基因组DNA为模板，用PCR扩增CTLA-4基因外显子1（包含第49位多态性位点）。引物序列：上游引物为 5’-GCTCTACTTCCTGAAGACCT-3’，下游引物为5’-AGTCTCACTCACCTTTGCAG-3’，引物由上海生工合成。PCR 反应体系25μL：基因组DNA 100 ng，灭菌去离子水10μL，10×buffer 5μL，2mmol·L－1 dNTPs 4μL，20μmol·L－1引物各0.5μL，Taq酶（5U·μL－1）。94℃预变性5min；94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸 40s，共30个循环；72℃延伸5min，最后4℃保存。
1.3.3 CTLA-4基因外显子49位点A/G多态性分析 代发表职称论文
用限制性内切酶BbvΙ对PCR扩增产物进行酶切：PCR扩增产物8.0μL，去离子水4.5μL，10×buffer 1.5μL，BbvΙ 2U，总体积15.0μL。37℃酶切过夜。酶切产物用12%非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，EB染色进行基因型鉴定。
1.4 统计学方法
研究样本的群体代表性用Hardy-Weinberg平衡检验确认，计量资料以均数±标准差表示，组间基因型频率、等位基因频率的比较用χ2检验，数据处理采用SPSS 11.0软件。
2 结果
2.1 CTLA-4基因第一外显子49位点基因型
含49A/G位点的PCR扩增产物作6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，扩增片段长度为162bp，49位点基因型为G/G时，162bp的PCR产物被消化为88bp和74bp 2个片段；基因型为A/A时则不能被酶切，电泳后只有1条162bp片段；基因型为A/G型时，则有3条片段，分别是74bp、88bp和162bp，见图1。
2.2 CTLA-4基因49位点A/G基因型及等位基因频率
经Hardy-Weinberg平衡法检验各组基因频率，等位基因的分布具群体代表性（AITDs组χ2=1.24，P=0.538；对照组 χ2=5.78，P=0.06）。结果显示，GD组CTLA-4基因49位点A/G基因型及等位基因频率与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；HT组与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1、2。表1 AITDs组与正常对照组CTLA-4基因49位点A/G基因型的比较（略）表2 AITDs组与正常对照组CTLA-4基因49位点A/G等位基因频率的比较（略）
2.3 不同性别AITDs患者CTLA-4基因型 代发表职称论文
不同性别CTLA-4基因49位点A/G基因型、等位基因频率，χ2检验结果显示P值均大于0.05，无统计学意义，结果见表3。表3 AITDs按性别分组后CTLA-4基因第一外显子49位点A/G基因型及等位基因频率（略）
3 讨论
CTLA-4属于细胞表面共刺激分子,与CD28属于同一家族,都是调节B7细胞表面分子,与B7分子结合可抑制T细胞增殖、活化，诱导T细胞耐受,维持机体细胞/体液免疫平衡。它表达于CD4+、CD25+调节性T细胞表面,在自身免疫炎症状态下,磷酸化的CTLA-4可以降低T细胞受体信号转导,控制自身反应性T细胞,抑制T细胞的活化及克隆［4］。人类CTLA-4基因定位于2q 33，在基因组中仅有一个拷贝。CTLA-4基因有3个多态性位点：启动子318位点C/T多态性；外显子1第17密码子49位点A/G多态性，外显子4 的3'非翻译区642位点的二核苷酸（AT）n可变重复序列。体外功能研究显示，外显子1的A49G位点和启动子区C-318T位点能显著影响CTLA- 4基因的转录活性和mRNA的表达水平［5-6］，导致个体自身免疫疾病的易患倾向不同。
AITDs是由T细胞介导的自身免疫过程，发病受多种易感基因和环境因素控制。许多研究均证明，CTLA-4基因存在多态性，与AITDs等自身免疫性疾病密切相关，国内外有GD病与CTLA-4基因多态性之间关系研究的报道，但所显示的结果并不完全一致。Yanagawa等［7］报道美国白种GD病人与 CTLA-4多态性有较少的相关性，而在意大利、日本、韩国人群中启动子多态性与AITD显著相关［8-10］。国内文献报道中，吕玲［11］等研究发现GD发病与CTLA-4第3外显子的3'非翻译区二核苷酸(AT)重复序列106bp和CTLA-4外显子1(49)A/G 等位基因多态性相关,但与CTLA-4(318)C/T多态性有较少的相关性。王巧宏［12］，周文旭［13］，张勤［14］等也均支持49位点A/G等位基因是AITD的危险因素之一。本研究采用PCR-RFLP技术，对CTLA-4基因第1外显子49位点基因多态性与AITDs的相关性进行分析，结果发现GD组外显子49位点基因型频率、等位基因频率与对照组相比差异有统计学意义，这与国内大部分研究结果一致。
由于GD发病女性明显高于男性，Donner等［15］研究结果认为GD患者与正常对照的等位基因携带水平有着明显的性别差异（P＜0.05）；我国青岛的研究也进行了性别的比较［16］，未发现统计学意义。我们在AITDs患者中，比较不同性别CTLA-4基因位点基因型、等位基因频率,经χ2检验结果显示P值均大于0.05, 无统计学意义，与Donner研究结果不一致，说明AITDs发病与等位基因49A/G在所研究的群体中可能不存在性别关联。
总之，本研究显示CTLA-4基因第一外显子49A/G多态性与AITDs有相关性，但与性别无关。可能是因为研究对象的种族差异造成的，CTLA-4各等位基因的分布频率在不同种族、不同民族，甚至在一个国家的不同地域是有很大差异的，因此与疾病的易感有关联的CTLA-4基因型也可能受到这一差异的影响。我们在后续研究中，需进一步增加研究病例数，同时，还需在基因、免疫、蛋白的表达和功能等方面进行更深入研究，以揭示此位点突变对AITDs的作用和致病机理。
代发表职称论文
【参考文献】
［1］Simmonds MJ,Gough SC. Unravelling the genetic complexity of autoimmune thyroid disease:HLA,CTLA-4 and beyond［J］. Clin Exp Immunol,2004,136(1):1-10.
［2］Einarsdottiv E,Soderstrom I,Lofgren Burstrom A, et al. The CTLA-4 region as a general autoimmunity factor:an external pedigree provide evidence for synergy with the HLA locus in the etiology of type 1 diabetes mellitus, Hashimoto′s thyroiditis and Graves′disease ［J］ . Eur J Hum Genet,2003,11(1):81-84.
［3］杨建军，张毓洪. CTLA-4基因的多态性与宁夏儿童1型糖尿病的相关性研究［J］.宁夏医学院学报，2006，28（5）：374-378.
［4］Eagar TN, Karandikar NJ,Bluestone JA, et al. The role of CTLA-4 in induction and maintenance of peripheral T cell tolerance［J］. Eur J Immunol, 2002,32(4):972-981.
［5］Ligers A, Teleshova N, Masterman T, et al. CTLA-4 gene expression is influenced by promoter and exon 1 polymorphisms［J］. Genes Immun, 2001, 2(3):145-152.
［6］Wang XB, Zhao X, Giscombe R, et al. A CTLA-4 gene polymorphism at position 318 in the promoter region affects the expression of protein［J］. Genes Immun,2002,3(4):233-234.
［7］Yanagawa T,Hidaka Y,Guimaraes V, et al .CTLA-4 gene polymorphism associated with Graves'disease in a Caucasian population ［J］.Clin Endocrinol Metab,1995,80(1):41-45.
［8］Antonio P, Gabriele G, Andrea G, et al. CT 60 single nucleotide polymorphisms of the cytotoxic T-lymphocyte associated antigen-4 gene region is associated with Graves′Disease in an Italian population［J］. Thyroid, 2005,15(3):232-238.
［9］Tomoyose T, Komiya I, Takara M, et al. Cytotoxic T lymphocyte antigen 4 gene polymorphisms and human T cell lymphotrophic virus1 infection: their associations with Hashimoto's thyroiditis in Japanese patients［J］. Thyroid, 2002,12(8):673-677.
［10］Park YJ, Chung HK, Park DJ, et al. Polymorphism in the promoter and exon 1 of the cytotoxic T lymphocyte antigen-4 gene associated with autoimmune thyroid disease in Koreans［J］. Thyroid, 2000,10(6): 453-459.
［11］陈悦.CTLA-4基因多态性与不同种族Graves'病患者的相关性［J］.中国优生与遗传杂志,2008,16(6):13-15.
［12］王巧宏，任跃忠.中国人CTLA-4基因外显子1多态性与Graves病的相关性［J］.中华内分泌代谢杂志，2003，19（4）：297-299.
［13］周文旭,施秉银,王惠芳,等. 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4基因多态性与自身免疫性甲状腺病的相关性［J］. 西安交通大学学报：医学版,2003,24 (2):170-173.
代发表职称论文
［14］张勤,李梅,杜亦陶,等. Graves眼病与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4基因启动子和外显子1多态性的相关性研究［J］. 中华内科杂志, 2004, 43(3): 214-215.
［15］Donner H, Rm H, Walfish PG, et al. CTLA-4 Alanine-17 confers genetic susceptibility to Graves'disease and to type I diabetes mellitus［J］. J Clin Endocri Metab,1997,82(1):143-146.
［16］王斐，马瑞欣.自身免疫性甲状腺病CTLA-4基因外显子1A/G49多态性研究［J］.免疫学杂志，2001,17（2）：116-118.
