静安口服液对中枢神经系统单胺类介质的影响研究

【摘要】  目的观察静安口服液对小鼠脑内单胺类神经递质及其代谢产物的影响。方法采用高效液相-电化学检测器对小鼠脑内单胺类神经递质及其代谢产物进行测定。结果3个剂量组均能显著降低小鼠脑内多巴胺的含量，同时可显著提高小鼠脑内5-羟色胺的代谢产物5-羟吲哚乙酸含量。结论 静安口服液具有调节上述递质含量的作用，可能是该方治疗小儿多发性抽动症的有效机制之一。

【关键词】  静安口服液；多发性抽动症；单胺类神经递质

             小儿多发性抽动症(Multiple Tics, MT)是一种儿童期起病的,通常伴有运动和行为异常的慢性神经精神障碍性疾病。小儿MT的患病率国内外报道不一,但最新文献报道约为1 ％,且近年来发病有明显增多的趋势,男女发病比例为3～4∶1[1]。本病若未得到早期、及时、合理、有效的治疗,则可使部分患儿的心智发育、认知能力和生活及社会适应能力的发展受到不同程度的负面影响[2]。我们应用具有滋肾平肝、熄风化痰功效的静安口服液（生地黄、白芍、僵蚕、天麻、钩藤、郁金、地龙、全蝎）治疗小儿MT已取得良好的疗效[3]，并对该方进行了系列的药效学研究[4]。同时，静安口服液已获得国家食品药品监督管理局的药物临床试验批件（2008L1133）。本研究在上述研究的基础上，就该方对小鼠脑内单胺类神经递质及其代谢产物的影响进行了相关的研究。

　　1实验材料

　　1.1药品与试剂
   
　　静安口服液，质量浓度1.1 g/mL，由南京市中医院药剂科提供；氟哌啶醇片，上海福得瑞药业有限公司生产，批号 041002；高氯酸、EDTA、柠檬酸、无水乙酸钠、二正丁胺均为国产分析纯级；甲醇为色谱醇，半胱胺酸为上海生化试剂公司进口分装；辛烷磺酸钠为日本化成生产的HPLC专用品；标准品去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5|HT)、5-羟吲哚乙酸(5|HIAA)、3，4-二羟基苯甲胺氢溴酸盐(DHBA)(内标)均为Sigma产品，实验用水为双蒸水。

　　1.2实验仪器
   
　　L|ECD|10A电化学检测器，LC|10AD双泵，SIL|10A自动进样器，CTO|10A VP柱温箱，CBM|10A工作站（均为日本岛津产品）；色谱柱为大连生化所生产的Kromascl C18不锈钢柱。

　　1.3实验动物
   
　　SPF级昆明种小鼠50只，雌雄各半，体质量18～22 g，南京医科大学提供。动物合格证号为：SCXK(苏)2001-0031。

　　2实验方法
   
　　将小鼠随机分为5组：空白对照组、氟哌啶醇组、静安口服液Ⅰ组、静安口服液Ⅱ组、静安口服液Ⅲ组。氟哌啶醇组灌服氟哌啶醇0.004 g/kg，静安口服液Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ组分别灌服静安口服液5.5 g/kg，11 g/kg，22 g/kg，空白对照组灌服同体积生理盐水，每日1次，连续7 d。于末次给药后30 min断头处死小鼠，在冰碟上迅速剖出所需脑区，称体质量，放入350 μL冰冷的0.4 mol/L高氯酸（含0.5 mol/L的EDTA，0.01 ％的半胱氨酸）中，并加入适量内标，在冰浴中电动匀浆，将匀浆液在4 ℃、12000 r/min条件下离心30 min，取上清液置于自动进样器的特制试管内，每次进样20 μL进行分析。流动相：乙酸钠 100 mmol/L，柠檬酸 85 mmol/L，二正丁胺 0.4 mmol/L，辛烷磺酸钠 1.5 mmol/L，EDTA 0.2 mmol/L，甲醇 18 %（v/v）。调pH=3.9，流速为1.0 mL/min,柱温为18 ℃。

　　3结果
   
　　见表1和图1，2，3。
   
　　与空白对照组比较，静安口服液能够显著降低小鼠脑内DA的含量，并显著提高小鼠脑内5|HIAA的含量(P＜0.05或P＜0.01)；且疗效优于氟哌啶醇组（P＜0.05或P＜0.01）。

　　表1静安口服液对小鼠脑内单胺类神经递质及其代谢产物的影响（略）

　　注：与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与氟哌啶醇组比较#P＜0.05 ，##P＜0.01；与静安口服液Ⅰ组比较，△P＜0.05

图1氟哌啶醇组（略）

　　图2  空白对照组（略）

　　图3  静安口服液Ⅰ组（略）

　　注：主要标示峰(按出峰时间先后计)（1）7，|NE，（2）17，|DA，（3）26，|5|HIAA，（4）44，|5|HT

　　4讨论
   
　　DA和5|HT及其衍生物为代表的中枢神经系统单胺类递质含量及其比值的失衡现已成为MT发病机制研究中的热点之一。本实验结果表明，静安口服液3个剂量组均能显著降低小鼠脑内DA含量（P<0.01），同时可显著提高小鼠脑内5|HT的代谢产物5|HIAA的含量，且均在数值上呈明显的量效关系。上述结果提示，中枢神经系统单胺类递质可能参与了MT的发病机制。静安口服液则可能是通过调节上述递质的含量与代谢而调整了中枢神经系统递质的活动与功能状态，进而成为该方治疗小儿MT的有效机制之一。此外，本实验结果还提示，上述递质的变化也可能作为小儿MT临床诊断及疗效判断的参考指标之一。

【参考文献】
  1]林高平，郑锦志.Tourrette Syndrome 研究进展与环路模型[J].国际精神病学杂志,2007,34（2）：98-100.

　　[2]刘智胜.小儿多发性抽动症[M].北京：人民卫生出版社,2002:108-109.

　　[3]张骠，孔群，林节，等.静安口服液为主治疗小儿多动性抽动症的临床研究[J].南京中医药大学学报,2008,24(3):156-159.

　　[4]张骠，孔群，许惠琴，等.静安口服液治疗小儿多发性抽动症的药效研究[J].中国药师,2008,11（8）：878-882.

　　[5]张林魁，钮心懿，徐瑞明，等.用高效液相色谱-电化学检测法同时测定脑内单胺递质及其主要代谢产物[J].药学学报，1987，22(8):591.