干扰素联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎过程中IL?12水平的动态变化
【摘要】 目的 动态观察α?干扰素联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎（CHB）过程中患者外周血 IL?12水平,观察CHB患者对干扰素联合胸腺肽治疗的反应及免疫状态。方法 100例患者随机分为α?干扰素联合胸腺肽组和α?干扰素组，采用ELISA方法及PCR方法检测各组IL?12和HBV?DNA含量，同时观察各组ALT水平的变化。结果 治疗结束时联合组与干扰素组比较,IL?12水平明显增加(P<0.05),联合组血清HBV DNA阴转率及ALT复常率指标也均优于干扰素组,且治疗结束后仍维持较长时间。结论 IL?12参与CHB的发病机制,并可作为评估干扰素联合胸腺肽抗病毒治疗的重要免疫指标。胸腺肽联合干扰素治疗CHB比单独使用干扰素疗效更好、更持久。
【关键词】 慢性乙型肝炎（CHB）;干扰素；胸腺肽
【Abstract】 Objective To observe the level of IL?12 of chronic hepatitis B(CHB) patients during the treatment with interferon αcombination with thymus peptide to forecast the therapeutic effect and the immune state. Methods 100 CHB patients were stochastically divided into interferon union thymus peptide and interferon groups . The level of IL?12 was tested by ELISA and the content of HBV?DNA was tested by PCR. Results At the end of treatment, the level of IL?12 of interferon union thymus peptide group was increased than that of interferon group (P＜ 0.05), the negative rate of HBV DNA and ALT were higher in interferon union thymus peptide group than that of interferon group (P＜ 0.05) and after treatment it still maintained for a long time. Conclusions IL?12 participates in the pathogenesis of CHB, and may takes an important indicator of assessing the anti?virus therapeutic effect of interferon combination with thymus peptide. The effect of thymus peptide combination with interferon for CHB is better and more lasting than the treatment of interferon.
【Key words】 Chronic hepatitis B (CHB); Interferon; Thymus peptide
近年研究表明,乙型肝炎病毒(HBV)在机体内持续感染与辅助T细胞（TH）1和TH2细胞失衡密切相关,白细胞介素?12(IL?12)是由巨噬细胞、B淋巴细胞等抗原提呈细胞在免疫应答中产生的细胞因子,其主要的生物学功能是诱导TH1细胞的分化、增加 CD8+T细胞的细胞毒活性，能特异性促进TH1细胞发育而抑制TH2细胞功能，同时增强自然杀伤细胞（NK细胞）的功能，促进细胞免疫功能，是一种重要的抗HBV细胞因子。免疫调节剂胸腺肽与抗病毒药物干扰素联合应用，可有效促进HBV清除，加快肝脏功能恢复。但关于胸腺肽与干扰素联合应用的临床研究报道较少。本实验通过检测胸腺肽与α?2b干扰素联合应用治疗老年慢性乙型肝炎（CHB）患者血清中IL?12及HBV?DNA含量变化,旨在观察胸腺肽联合α?2b干扰素对老年CHB的治疗效果。
1 材料与方法
1.1 研究对象
100 例CHB 患者均系2004年至2006年6月住院及门诊患者,符合2000年西安会议制定的病毒性肝炎防治方案的诊断标准，男73例,女27例,年龄61～72〔平均（68.2±4.1）〕岁,所有患者均排除甲、丙、丁、戊型肝炎等病毒重叠感染以及其他原因(酒精、药物等) 引起的肝脏损害。治疗前均未接受其他抗病毒药物治疗及免疫调节剂治疗。以20例健康志愿者作为正常对照。
1.2 治疗方法
①联合组:55例,α?2b干扰素300万U肌肉注射,1次/d,2 w后改隔日1次；胸腺肽90 mg加入10%葡萄糖注射液静脉滴注1次/d,2 w后改隔日1次,②干扰素组:45例,单用α?2b干扰素,用法同联合组。疗程6个月。
1.3 观察指标
各组均于治疗前、治疗后第3 、6 、12个月后检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）
1.4 检测方法
1.4.1 ALT水平检测 用自动生化仪检测。
1.4.2 HBV DNA定量检测
乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝全血2 ml用生理盐水2～3倍体积稀释,混匀，加入盛有2 ml淋巴细胞分离液的离心管中,2 500 r/min离心10 min，吸取中间层单个核细胞，生理盐水洗涤,10 000 r/min离心5 min,留取沉积物，用 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）10 ml洗涤5次,以去除残留的血浆HBV DNA,收集末次洗涤液(500 μl)及细胞,调整细胞浓度至2×109/L,取100 μl细胞悬液加等量细胞裂解液反应20 min,显微镜观察证实细胞完全裂解,用外周血单个核细胞（PBMC）裂解液常规碱裂解法提取HBV DNA,采用美国BIO·lcycler荧光定量PCR仪及深圳匹基生物工程有限公司出品HBV DNA荧光定量检测试剂盒测定,由计算机软件分析计算定量结果，试验的灵敏度为103拷贝/ml,病例均以＜103拷贝/ml为阴性结果。为便于统计,以检测结果绝对值进行比较。
1.4.3 血清IL?12浓度检测 1.5 统计学处理 使用SPSS11.5统计软件进行t检验和χ2检验。 2 结 果 2.1 两组治疗前后HBV DNA 水平比较 在治疗3 个月差异无显著性(P＜0.05)，治疗6 个月时，联合组阴转率显著高于干扰素组，治疗12个月时，联合组的HBV DNA阴转率依然高于干扰素组(P＜0.05)。见表1。表1 治疗后不同时间两组HBV DNA阴转率〔n（略）〕 2.2 ALT恢复情况 联合组在治疗结束时ALT恢复正常46例(83.36%)，干扰素组为22例(48.88%)，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。 2.3 血清IL?12水平 在治疗前患者血清IL?12浓度差异无显著性(P>0.05)，治疗3个月时联合组较干扰素组有所增加,治疗结束6个月时联合组患者的IL?12水平较干扰素组明显增加(P<0.05),且治疗结束12个月时联合组患者的IL?12水平依然高于干扰素组(P<0.05)。见表2。表2 患者治疗前后外周血 IL?12含量变化(略) 3 讨 论 α?2b干扰素通过和肝细胞膜上神经节甙酯或糖蛋白组成的特异性结合受体结合，诱生多种抗病毒蛋白，从而抑制病毒在细胞内的复制，是CHB治疗中最主要的抗病毒药物〔1〕。但治疗CHB的HBV DNA阴转率较低,不能在人体内彻底清除 HBV，因此停药后复发率较高。胸腺肽具有诱导淋巴细胞活化产生IL?12、α?干扰素、γ?干扰素等细胞因子,促进免疫细胞抗原递呈的作用。IL?12能促进 TH1型细胞增殖分化和产生TH1型细胞因子,抑制 TH2 型细胞的增殖分化,γ?干扰素又可增强 IL?12的产生,协同促进TH1型细胞增殖。Kimura等经小鼠实验表明IL?12能可有效抑制肝细胞中HBV基因表达和复制〔2〕，胸腺肽与干扰素联合使用，起到协同抗病毒效应〔3〕,可以从多方面发挥抑制或阻断HBV复制的作用、清除肝细胞内 HBV、提高抗HBV疗效。 本实验显示,联合组与干扰素组治疗前血清 IL?12水平均较正常对照组低,治疗后6个月联合组IL?12水平明显高于干扰素组,且治疗结束12个月后仍较干扰素组有统计学差异。干扰素联合胸腺肽治疗CHB与单用干扰素组比较,症状及体征消失快，血清HBV DNA、ALT恢复正常率也优于干扰素组，治疗结束后仍可维持较长时间。同时本实验还显示,联合组IL?12 的血清水平随血清 HBV DNA拷贝数降低而增高,表明IL?12 在抑制病毒复制、病毒清除和疾病恢复方面具有重要作用。临床动态监测血清IL?12水平变化,是预测干扰素联合胸腺肽治疗老年CHB患者疗效及免疫状态的指标之一;二者联合应用治疗老年CHB是一条更有效、持久的治疗途径。 【参考文献】
用特异性双抗夹心ELISA法，试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供，按说明书操作，同时检测标准品，绘制标准曲线。
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2 Kimura K,Kakimi K,Wieland S,et al.Activated intrahepatic antigen?presenting cells inhibit hepatitis B virus replication in the liver of transgenic mice〔J〕.J Immunol，2002；169(9):5188?95.
3 杨素清.干扰素联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎临床疗效观察〔J〕.临床肝胆病杂志，2006；2(2):88.
