感染旋毛虫兔血清酶变化与虫体密度关系
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时间：2011年3月28日 15:59
【摘要】 目的：探讨旋毛虫病时肌酸激酶(CK)、醛缩酶(ALD)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)与虫体密度的关系，为旋毛虫病血清酶的检测分析提供参考资料。方法：将实验用兔随机分成三组：轻度感染组、重度感染组和对照组，感染后不同时间检测血清CK、ALD、ALT、AST和LDH活性，处死后用人工消化法进行肌幼虫计数。结果：兔旋毛虫病时五种血清酶(CK、ALD、ALT、AST和LDH)均升高，五种血清酶与宿主腓肠肌虫体密度有相关性。结论：CK、ALD、ALT、AST及LDH与宿主腓肠肌虫体密度有相关性。
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【关键词】 旋毛虫病;血清;酶类;虫体密度;兔
【ABSTRACT】 Objective：To study the relationships between serum creatine kinase(CK)，fructosediphosphate aldolase (ALD)，alanine aminotransferase(ALT)，aspartate aminotransferase (AST)，lactate dehydrogenase (LDH)and the larvae density in rabbits infected with Trichinella spiralis，so as to supply basic data for serum enzymes examination in trichinosis.Methods：Experimental rabbits were divided into three groups：lightly?infected group，heavily?infected group，and control group.The sera were obtained at interval stages? postinfection from infected rabbits，the activities of serum CK，ALD，ALT，AST and LDH were determined.After the rabbits infected with T.spiralis were killed，the muscles larvae numbers were counted by an artifical digestion technique.Results：The level of the five serum enzymes(CK、ALD、ALT、AST and LDH)all raised.There was positive significant correlation between the levels of five serum enzymes and larvae density in the gastrocnemius muscles.Conclusion：There was significant correlation between the peaks values of five serum enzymes(CK、ALD、ALT、AST and LDH)and larvae density in the gastrocnemius muscles.
【KEY WORDS】 Trichinosis,Serum,Enzymes,Larvae Density ,Rabbits
旋毛虫病(Trichinosis)是由旋毛形线虫(Trichinella spiralis)引起的一种严重的人兽共患寄生虫病。人类多因进食未煮熟的猪肉而感染，临床上以发热、水肿、肌痛及嗜酸性粒细胞增多为主要特征，可经肌肉活检而确诊，但因活检受到取材限制，血清酶检测就成为辅助诊断旋毛虫病的一项重要的实验室检查。研究表明旋毛虫感染宿主后，宿主多种血清酶如肌酸激酶 (CK)、醛缩酶(ALD)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)等可发生变化[1?6]，但血清酶活性的升高与病情严重程度[3，6]及肌肉虫体负荷的关系还有不同意见[1，6]。本研究用旋毛虫感染兔进一步观察了五种血清酶(即CK、ALD、ALT、 AST、LDH)的变化与肌肉虫体负荷的关系，为旋毛虫病血清酶的检测分析提供有用的基础资料。
1 材料与方法
1.1 仪器和试剂 Aeroset全自动生化分析仪(美国雅培公司)，血清酶测定试剂盒(北京世诊中拓生物技术有限公司)，人工消化液(胃蛋白酶0.6g，浓盐酸1mL，蒸馏水100mL)。
1.2 旋毛虫肌幼虫的制备 用小白鼠传代保种的旋毛虫感染昆明小鼠，35d后处死，将全部肌肉剪碎，按每g肌肉加入60mL人工消化液的比例，用人工消化法制备肌幼虫，用5%明胶调至约1 000条/mL和约2 000条/mL两种悬液。
1.3 动物分组及感染 雄性健康家兔31只，体重2.0～2.6kg。随机分成3组：轻感组11只，重感组10只，对照组10只。轻感组每只灌胃法喂入约1 000条/mL的幼虫明胶悬液5mL，重感组每只喂入约2 000条/mL的幼虫明胶悬液5mL，对照组喂入5%明胶5mL。
1.4 血液标本采集 于感染前及感染后第1、2、3、4、10、14周从耳缘静脉取血1.5mL，分离血清保存于4℃冰箱，于24h内检测。
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1.5 血清CK、ALD、ALT、AST、LDH检测 用购置试剂盒在生化分析仪上检测，保证仪器在质控状态，方法均为速率法。
1.6 每克肌肉荷虫量(LPG)的观察 于第14周血标本取完后，将两个感染组兔处死，取每只兔的腓肠肌，如前述用人工消化法进行肌幼虫计数，算出每克肌肉荷虫量(条/g)。
1.7 统计学分析 计量资料用(x±s)表示，两组间比较用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，差异有显著性时再做q检验，以进行均数间的两两比较;相关性采用直线回归及相关分析法。
2 结果
2.1 五种血清酶的变化
感染组五种血清酶总体上都有不同程度的升高，出现先升后降的动态变化过程，血清酶数值的最高峰平均出现在第3周，重感组高于轻感组(差异有统计学意义)。除血清LDH轻感组与对照差异无统计学意义外，血清LDH重感组及其他几种血清酶(CK、ALD、ALT和AST)与对照组相比都有不同程度的升高[7]。
2.2 感染旋毛虫兔腓肠肌中虫体密度
21只感染兔在腓肠肌中均发现肌幼虫。虫体密度重感组高于轻感组，分别为(1 913±1 069)条/g和(927±522)条/g(P<0.05)。
2.3 感染兔五种血清酶与虫体密度的相关性
分别计算CK、ALD、ALT、AST、LDH与虫体密度的相关性，每项指标均用其峰值(血清酶峰值在第3周)，虫体密度即上述腓肠肌中的虫体密度。结果五种血清酶CK、ALD、ALT、AST、LDH与虫体密度的相关系数分别是0.8591、0.6150、0.8097、0.7639及0.7984(P<0.05)，均呈正相关。
3 讨论
本研究所检测的五种血清酶中，据文献资料CK和ALD有性别差别，其余三种(ALT、AST和LDH)没有性别差别[8]。为避免可能因性别造成的影响，故选择同性别实验动物。兔是研究旋毛虫病时常用实验动物，本研究将感染兔处死取腓肠肌消化计数，均发现肌幼虫，说明全部感染成功。作者曾观察肌幼虫在感染旋毛虫兔横纹肌内的分布，结果在舌肌、咬肌、膈肌中虫体密度较大，在肱三头肌、肩胛肌、肱二头肌、腓肠肌和胸大肌虫体密度居中，肋间肌和腰肌虫体密度较小[9]。腓肠肌虫体密度居中，易于取材，是旋毛虫病肌肉活检常用的取材部位，故本研究选用腓肠肌检查虫体密度。
血清酶检测是旋毛虫病一项重要的实验室辅助检查。在旋毛虫病时，关于血清酶活性与感染量、临床症状或肌肉中虫体密度的关系尚存在不同意见。 Bowman等(1991)用狗实验结果为CK活性与幼虫感染剂量正相关[10];Lindor等(1983)报道感染旋毛虫豚鼠，CK峰值与感染剂量呈正相关[1]。也有相反的报道，Wisniewska(1970)用旋毛虫感染大鼠，结果CK活性与虫体密度无直接关系[6];在一组旋毛虫病人，LDH 活性与临床严重性之间无相关性[3]，分析这种无相关性的原因可能与病人从感染到检测血清酶的时间间隔不同有关，而旋毛虫感染者的血清酶是动态变化的。以上两种不同结果限制了血清酶检测在旋毛虫病的临床应用价值。动物实验，因严格控制实验条件，将更有助于获得规律性的结果。本研究观测到五种血清酶的活性与宿主腓肠肌虫体密度呈正相关，与Lindor等(1983)和Bowman等(1991)报道的结果一致[1，10]。
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旋毛虫感染时血清酶的增高是肌细胞损伤、肌膜破坏、肌膜渗透能力增加等原因，导致酶漏向血液所致[11]，与幼虫感染量及肌肉虫体负荷密切相关。本研究观测到五种血清酶与宿主腓肠肌虫体密度呈正相关，而肌肉中虫体密度是影响旋毛虫病病情的重要因素。因而，血清酶的水平在一定程度上可以反映旋毛虫病的病情。
【参考文献】
1 Lindor LJ,Wasson DL,Gleich GJ.Effects of trichinellosis on levels of eosinophils，eosinophil major basic protein，creatine kinase and basophils in the guinea pig[J].Parasite Immunol，1983，4:13?14.
2 Tassi C,Materazzi J,Pozio E,et al.Creatine kinase isoenzymes in human trichinellosis [J].Clin Chim Acta,1995，239(2):197?202.
3 Boczon K，Winiecka J，Kociecka W，et al.The diagnostic value of enzymatic and immunological tests in human trichinellosis[J].Tropenmed Parasitol,1981，32(2):109?114.
4 Simon JW，Riddell NJ，Wong WT，et al.Further observations on the first documented outbreak of trichinellosis in Hong Kong[J].Trans R Soc Trop Med Hyg，1986，80(3):394?397.
5 Pozio E，Varese P，Morales MA，et al.Comparison of human trichinellosis caused by Trichinella spiralis and by Trichinella britovi[J].Am J Trop Med Hyg，1993，48(4):568?575.
6 Wisniewska M.Trichinella spiralis:diagnostic value of creatine kinase levels in rat and man[J].Exp Parasitol，1970，28:577?584.
7 李立宏，张进顺，李宝亮，等.感染旋毛虫兔五种血清酶变化的研究[J].河北北方学院学报:医学版，2006，23(1)：30?32.
8 康格非.临床生物化学和生物化学检验[M].第1版.北京：人民卫生出版社，1998.153.
9 李立宏，唐宏伟，赵旭辉，等.旋毛虫肌幼虫在实验感染兔横纹肌内的分布[J].中国人兽共患病杂志，2003，19(1)：92?93.
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10Bowman DD，Frongillo MF，Johnston KB，et al.Signs，larval burdens,and serological responses of dogs experimentally infected with Trichinella spiralis Owen，1835[J].Folia Parasitologica，1991，38(3):245?253.
11朱兴全，龚广学，薛富汉，等.旋毛虫病[M].第1版.郑州：河南科学技术出版社，1993.145，86.
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【关键词】 旋毛虫病;血清;酶类;虫体密度;兔
【ABSTRACT】 Objective：To study the relationships between serum creatine kinase(CK)，fructosediphosphate aldolase (ALD)，alanine aminotransferase(ALT)，aspartate aminotransferase (AST)，lactate dehydrogenase (LDH)and the larvae density in rabbits infected with Trichinella spiralis，so as to supply basic data for serum enzymes examination in trichinosis.Methods：Experimental rabbits were divided into three groups：lightly?infected group，heavily?infected group，and control group.The sera were obtained at interval stages? postinfection from infected rabbits，the activities of serum CK，ALD，ALT，AST and LDH were determined.After the rabbits infected with T.spiralis were killed，the muscles larvae numbers were counted by an artifical digestion technique.Results：The level of the five serum enzymes(CK、ALD、ALT、AST and LDH)all raised.There was positive significant correlation between the levels of five serum enzymes and larvae density in the gastrocnemius muscles.Conclusion：There was significant correlation between the peaks values of five serum enzymes(CK、ALD、ALT、AST and LDH)and larvae density in the gastrocnemius muscles.
【KEY WORDS】 Trichinosis,Serum,Enzymes,Larvae Density ,Rabbits
旋毛虫病(Trichinosis)是由旋毛形线虫(Trichinella spiralis)引起的一种严重的人兽共患寄生虫病。人类多因进食未煮熟的猪肉而感染，临床上以发热、水肿、肌痛及嗜酸性粒细胞增多为主要特征，可经肌肉活检而确诊，但因活检受到取材限制，血清酶检测就成为辅助诊断旋毛虫病的一项重要的实验室检查。研究表明旋毛虫感染宿主后，宿主多种血清酶如肌酸激酶 (CK)、醛缩酶(ALD)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)等可发生变化[1?6]，但血清酶活性的升高与病情严重程度[3，6]及肌肉虫体负荷的关系还有不同意见[1，6]。本研究用旋毛虫感染兔进一步观察了五种血清酶(即CK、ALD、ALT、 AST、LDH)的变化与肌肉虫体负荷的关系，为旋毛虫病血清酶的检测分析提供有用的基础资料。
1 材料与方法
1.1 仪器和试剂 Aeroset全自动生化分析仪(美国雅培公司)，血清酶测定试剂盒(北京世诊中拓生物技术有限公司)，人工消化液(胃蛋白酶0.6g，浓盐酸1mL，蒸馏水100mL)。
1.2 旋毛虫肌幼虫的制备 用小白鼠传代保种的旋毛虫感染昆明小鼠，35d后处死，将全部肌肉剪碎，按每g肌肉加入60mL人工消化液的比例，用人工消化法制备肌幼虫，用5%明胶调至约1 000条/mL和约2 000条/mL两种悬液。
1.3 动物分组及感染 雄性健康家兔31只，体重2.0～2.6kg。随机分成3组：轻感组11只，重感组10只，对照组10只。轻感组每只灌胃法喂入约1 000条/mL的幼虫明胶悬液5mL，重感组每只喂入约2 000条/mL的幼虫明胶悬液5mL，对照组喂入5%明胶5mL。
1.4 血液标本采集 于感染前及感染后第1、2、3、4、10、14周从耳缘静脉取血1.5mL，分离血清保存于4℃冰箱，于24h内检测。
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1.5 血清CK、ALD、ALT、AST、LDH检测 用购置试剂盒在生化分析仪上检测，保证仪器在质控状态，方法均为速率法。
1.6 每克肌肉荷虫量(LPG)的观察 于第14周血标本取完后，将两个感染组兔处死，取每只兔的腓肠肌，如前述用人工消化法进行肌幼虫计数，算出每克肌肉荷虫量(条/g)。
1.7 统计学分析 计量资料用(x±s)表示，两组间比较用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，差异有显著性时再做q检验，以进行均数间的两两比较;相关性采用直线回归及相关分析法。
2 结果
2.1 五种血清酶的变化
感染组五种血清酶总体上都有不同程度的升高，出现先升后降的动态变化过程，血清酶数值的最高峰平均出现在第3周，重感组高于轻感组(差异有统计学意义)。除血清LDH轻感组与对照差异无统计学意义外，血清LDH重感组及其他几种血清酶(CK、ALD、ALT和AST)与对照组相比都有不同程度的升高[7]。
2.2 感染旋毛虫兔腓肠肌中虫体密度
21只感染兔在腓肠肌中均发现肌幼虫。虫体密度重感组高于轻感组，分别为(1 913±1 069)条/g和(927±522)条/g(P<0.05)。
2.3 感染兔五种血清酶与虫体密度的相关性
分别计算CK、ALD、ALT、AST、LDH与虫体密度的相关性，每项指标均用其峰值(血清酶峰值在第3周)，虫体密度即上述腓肠肌中的虫体密度。结果五种血清酶CK、ALD、ALT、AST、LDH与虫体密度的相关系数分别是0.8591、0.6150、0.8097、0.7639及0.7984(P<0.05)，均呈正相关。
3 讨论
本研究所检测的五种血清酶中，据文献资料CK和ALD有性别差别，其余三种(ALT、AST和LDH)没有性别差别[8]。为避免可能因性别造成的影响，故选择同性别实验动物。兔是研究旋毛虫病时常用实验动物，本研究将感染兔处死取腓肠肌消化计数，均发现肌幼虫，说明全部感染成功。作者曾观察肌幼虫在感染旋毛虫兔横纹肌内的分布，结果在舌肌、咬肌、膈肌中虫体密度较大，在肱三头肌、肩胛肌、肱二头肌、腓肠肌和胸大肌虫体密度居中，肋间肌和腰肌虫体密度较小[9]。腓肠肌虫体密度居中，易于取材，是旋毛虫病肌肉活检常用的取材部位，故本研究选用腓肠肌检查虫体密度。
血清酶检测是旋毛虫病一项重要的实验室辅助检查。在旋毛虫病时，关于血清酶活性与感染量、临床症状或肌肉中虫体密度的关系尚存在不同意见。 Bowman等(1991)用狗实验结果为CK活性与幼虫感染剂量正相关[10];Lindor等(1983)报道感染旋毛虫豚鼠，CK峰值与感染剂量呈正相关[1]。也有相反的报道，Wisniewska(1970)用旋毛虫感染大鼠，结果CK活性与虫体密度无直接关系[6];在一组旋毛虫病人，LDH 活性与临床严重性之间无相关性[3]，分析这种无相关性的原因可能与病人从感染到检测血清酶的时间间隔不同有关，而旋毛虫感染者的血清酶是动态变化的。以上两种不同结果限制了血清酶检测在旋毛虫病的临床应用价值。动物实验，因严格控制实验条件，将更有助于获得规律性的结果。本研究观测到五种血清酶的活性与宿主腓肠肌虫体密度呈正相关，与Lindor等(1983)和Bowman等(1991)报道的结果一致[1，10]。
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旋毛虫感染时血清酶的增高是肌细胞损伤、肌膜破坏、肌膜渗透能力增加等原因，导致酶漏向血液所致[11]，与幼虫感染量及肌肉虫体负荷密切相关。本研究观测到五种血清酶与宿主腓肠肌虫体密度呈正相关，而肌肉中虫体密度是影响旋毛虫病病情的重要因素。因而，血清酶的水平在一定程度上可以反映旋毛虫病的病情。
【参考文献】
1 Lindor LJ,Wasson DL,Gleich GJ.Effects of trichinellosis on levels of eosinophils，eosinophil major basic protein，creatine kinase and basophils in the guinea pig[J].Parasite Immunol，1983，4:13?14.
2 Tassi C,Materazzi J,Pozio E,et al.Creatine kinase isoenzymes in human trichinellosis [J].Clin Chim Acta,1995，239(2):197?202.
3 Boczon K，Winiecka J，Kociecka W，et al.The diagnostic value of enzymatic and immunological tests in human trichinellosis[J].Tropenmed Parasitol,1981，32(2):109?114.
4 Simon JW，Riddell NJ，Wong WT，et al.Further observations on the first documented outbreak of trichinellosis in Hong Kong[J].Trans R Soc Trop Med Hyg，1986，80(3):394?397.
5 Pozio E，Varese P，Morales MA，et al.Comparison of human trichinellosis caused by Trichinella spiralis and by Trichinella britovi[J].Am J Trop Med Hyg，1993，48(4):568?575.
6 Wisniewska M.Trichinella spiralis:diagnostic value of creatine kinase levels in rat and man[J].Exp Parasitol，1970，28:577?584.
7 李立宏，张进顺，李宝亮，等.感染旋毛虫兔五种血清酶变化的研究[J].河北北方学院学报:医学版，2006，23(1)：30?32.
8 康格非.临床生物化学和生物化学检验[M].第1版.北京：人民卫生出版社，1998.153.
9 李立宏，唐宏伟，赵旭辉，等.旋毛虫肌幼虫在实验感染兔横纹肌内的分布[J].中国人兽共患病杂志，2003，19(1)：92?93.
快速论文发表
10Bowman DD，Frongillo MF，Johnston KB，et al.Signs，larval burdens,and serological responses of dogs experimentally infected with Trichinella spiralis Owen，1835[J].Folia Parasitologica，1991，38(3):245?253.
11朱兴全，龚广学，薛富汉，等.旋毛虫病[M].第1版.郑州：河南科学技术出版社，1993.145，86.
