铁棒锤浸膏对大鼠佐剂性关节炎治疗作用的研究
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时间：2011年3月18日 10:10
【摘要】 目的 探讨铁棒锤浸膏对佐剂性关节炎的治疗作用及作用机制。方法 建立佐剂性关节炎大鼠模型，观察铁棒锤浸膏，对大鼠足肿胀度及血清白细胞介素-1β(IL-lβ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。结果 铁棒锤浸膏给药组40mg/kg及阳性药组能显著降低模型大鼠的足趾肿胀度(P＜0.05)及IL-lβ(P＜0.05)和TNF-α(P＜0.05)含量。结论 铁棒锤浸膏具有抗炎作用，其机制与降低IL-lβ和TNF-α水平有关。
教育教学论文发表
【关键词】 铁棒锤 佐剂性关节炎 细胞因子
铁棒锤是毛茛科乌头属植物伏毛铁棒锤(Acontium flavum Hand-Mazz)的块根，气特异，味辛而麻舌，有毒。为陕、甘、宁等省应用较广的一种民间草药，据《陕西中草药》记载，该药可“活血祛瘀，祛风湿，止痛，消肿败毒，去腐生肌，止血，治疗跌打损伤，风湿性关节炎，腰腿痛，劳伤，恶疮痈肿，无名肿毒，冻疮，毒蛇咬伤”［1］。现代药理研究发现，该药具有抗炎、麻醉止痛、抗肿瘤等作用［2］，但其抗炎作用机制目前尚未完全阐明，为此本研究探讨铁棒锤浸膏对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用，并进一步分析其作用机制。
1 实验材料
1.1 实验动物 清洁级雄性SD大鼠，体重180～220g，购自宁夏医科大学实验动物中心，动物生产许可证编号：SCXR(宁)2005-001，自由摄食和饮水，室温保持(20±2)℃，湿度为(50±2)%，适应性喂养1周实验。
1.2 试剂和材料 铁棒锤购自宁夏六盘山隆德药材基地，经固原药检所鉴定为铁棒锤。弗氏完全佐剂，购自美国Sigma公司；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-lβ(IL-lβ)放射免疫试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司；足容积测量仪，自制。
1.3 实验方法
1.3.1 铁棒锤浸膏的制备 取铁棒锤500g，70%乙醇回流提取3次，每次1h，回收乙醇，配成4mg/mL的溶液，备用。
1.3.2 大鼠佐剂性关节炎(AA)模型建立［3］ 每只大鼠于左后足趾中部注射0.1mL弗氏完全佐剂，建立模型。
1.3.3 动物分组 取大鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、雷公藤组(阳性药组)、铁棒锤浸膏10mg/kg组、铁棒锤浸膏40mg/kg组。空白对照组和模型组灌胃(ig)给予等体积的蒸馏水，阳性药组给予雷公藤多苷片混悬液9.5mg/kg(ig)，给药组分别给予铁棒锤浸膏10mg/kg 和铁棒锤浸膏40mg/kg(ig)。连续给药21d，并于给药第7、14、20天测定大鼠左后足趾肿胀度。末次给药2h后，大鼠眼眶静脉取血，分离血清，置-20℃冰箱保存，备用。按厂家试剂盒说明采用放射性免疫法测定IL-lβ及TNF-α。
教育教学论文发表
1.4 统计学方法 用SPSS 12.0软件处理；实验结果以(±s)表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2 实验结果
2.1 铁棒锤浸膏对佐剂性关节炎模型大鼠血清IL-lβ、TNF-α的影响(表1)
与正常对照组比较，模型组血清IL-lβ、TNF-α含量显著升高(P＜0.05)；与模型组比较，阳性药组和铁棒锤浸膏40mg/kg组血清IL-lβ、TNF-α含量显著降低(P＜0.05)。
2.2 铁棒锤浸膏对佐剂性关节炎模型大鼠左后足趾肿胀度的影响(表2)
浸膏给药第14天及第21天，与正常对照组比较，模型组大鼠足趾肿胀度显著增加(P＜0.05)；与模型组比较，阳性药组及铁棒锤浸膏40mg/kg组均能够显著降低足趾肿胀度(P＜0.05)。
表1 对AA大鼠IL-lβ、TNF-α的影响（略）
与模型组比较▲P＜0.01；与正常对照组比较★P＜0.05
表2 各组AA大鼠左后足趾肿胀度的比较（略）
与模型组比较▲P＜0.05；与正常对照组比较★P＜0.05
3 讨论
铁棒锤是宁夏六盘山区的民间草药，当地群众采挖其块根供药用，因外表黑褐色，形似“棒锤”，俗称“铁棒锤”。主要用于治疗风湿等病症，在民间应用较久。近年来对铁棒锤的研究集中在含量测定［4］、质量标准［5］、野生资源保护［1］等方面。陆满文［6］等采用大鼠蛋清急性关节肿、甲醛慢性关节肿和棉球肉芽肿实验发现铁棒锤总碱有显著的抗炎消肿作用，但未探讨其作用机制，为此，本实验以大鼠佐剂性关节炎为模型，探讨铁棒锤浸膏的抗炎作用及作用机制。研究结果发现，铁棒锤浸膏40mg/kg能明显降低大鼠足趾肿胀度，提示铁棒锤浸膏有抗炎作用。IL-1β是一种促炎细胞因子，它可刺激滑膜引起细胞增生并产生蛋白激酶，在关节软骨破坏中起重要作用。TNF-α与IL-1的效应及靶细胞的范围有很大的相似性，二者常常同时合成或分泌，被称为“姐妹细胞因子”［7-9］。实验结果发现，铁棒锤浸膏40mg/kg有降低IL-lβ、TNF-α等细胞因子的作用。提示铁棒锤浸膏具抗炎作用的机制与降低IL-lβ、TNF-α细胞因子含量有关。教育教学论文发表
【参考文献】
［1］ 李满，杨浩，康建宏，等.宁夏濒危药用植物铁棒锤的资源利用与保护［J］.宁夏农林科技，2007，1：34-35.
［2］ 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(27卷)［M］.北京：科学出版社，1979：318-319.
［3］ 徐叔云，卞如镰.陈修药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1991：723.
［4］ 付雪艳，董琳，张义伟，等.HPLC 法测定铁棒锤中乌头碱的含量［J］.科协论坛，2007，8：456.
［5］ 杨智锋，刘建峰，张红，等.铁棒锤药材质量标准研究［J］.中国中药杂志，2005，30(22)：1771-1773
［6］ 陆满文，韩生银.伏毛铁棒锤药理研究：Ⅲ伏毛铁棒锤生物碱对大白鼠实验性炎症之抗炎症作用［J］.宁夏医科大学学报，1982，(1)：27.
［7］ 苗兵，杨金，周中光，等.伸筋草乙醇提取物对佐剂性关节炎大鼠类风湿因子和血清细胞因子的影响［J］.中医药信息，2008，25(3)：22-24.
［8］ Niki Y，Yamada H，Seki S.Macrophage-andneutrophil-dominant arthritis in human IL-1 alphatransgenicmice［J］.J Clin Invest，2001，107：1127-1135.
教育教学论文发表
［9］ Kontoyiannis D，Pasparakis M，Pizarro TT.Impairedon/off regulation of TNF biosynthesis in mice lacking TNFAU-richelements：implications for joint and gut-associate dimmunopathologies［J］.Immunity，1999，(10)：387-398.
教育教学论文发表
【关键词】 铁棒锤 佐剂性关节炎 细胞因子
铁棒锤是毛茛科乌头属植物伏毛铁棒锤(Acontium flavum Hand-Mazz)的块根，气特异，味辛而麻舌，有毒。为陕、甘、宁等省应用较广的一种民间草药，据《陕西中草药》记载，该药可“活血祛瘀，祛风湿，止痛，消肿败毒，去腐生肌，止血，治疗跌打损伤，风湿性关节炎，腰腿痛，劳伤，恶疮痈肿，无名肿毒，冻疮，毒蛇咬伤”［1］。现代药理研究发现，该药具有抗炎、麻醉止痛、抗肿瘤等作用［2］，但其抗炎作用机制目前尚未完全阐明，为此本研究探讨铁棒锤浸膏对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用，并进一步分析其作用机制。
1 实验材料
1.1 实验动物 清洁级雄性SD大鼠，体重180～220g，购自宁夏医科大学实验动物中心，动物生产许可证编号：SCXR(宁)2005-001，自由摄食和饮水，室温保持(20±2)℃，湿度为(50±2)%，适应性喂养1周实验。
1.2 试剂和材料 铁棒锤购自宁夏六盘山隆德药材基地，经固原药检所鉴定为铁棒锤。弗氏完全佐剂，购自美国Sigma公司；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-lβ(IL-lβ)放射免疫试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司；足容积测量仪，自制。
1.3 实验方法
1.3.1 铁棒锤浸膏的制备 取铁棒锤500g，70%乙醇回流提取3次，每次1h，回收乙醇，配成4mg/mL的溶液，备用。
1.3.2 大鼠佐剂性关节炎(AA)模型建立［3］ 每只大鼠于左后足趾中部注射0.1mL弗氏完全佐剂，建立模型。
1.3.3 动物分组 取大鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别为空白对照组、模型组、雷公藤组(阳性药组)、铁棒锤浸膏10mg/kg组、铁棒锤浸膏40mg/kg组。空白对照组和模型组灌胃(ig)给予等体积的蒸馏水，阳性药组给予雷公藤多苷片混悬液9.5mg/kg(ig)，给药组分别给予铁棒锤浸膏10mg/kg 和铁棒锤浸膏40mg/kg(ig)。连续给药21d，并于给药第7、14、20天测定大鼠左后足趾肿胀度。末次给药2h后，大鼠眼眶静脉取血，分离血清，置-20℃冰箱保存，备用。按厂家试剂盒说明采用放射性免疫法测定IL-lβ及TNF-α。
教育教学论文发表
1.4 统计学方法 用SPSS 12.0软件处理；实验结果以(±s)表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2 实验结果
2.1 铁棒锤浸膏对佐剂性关节炎模型大鼠血清IL-lβ、TNF-α的影响(表1)
与正常对照组比较，模型组血清IL-lβ、TNF-α含量显著升高(P＜0.05)；与模型组比较，阳性药组和铁棒锤浸膏40mg/kg组血清IL-lβ、TNF-α含量显著降低(P＜0.05)。
2.2 铁棒锤浸膏对佐剂性关节炎模型大鼠左后足趾肿胀度的影响(表2)
浸膏给药第14天及第21天，与正常对照组比较，模型组大鼠足趾肿胀度显著增加(P＜0.05)；与模型组比较，阳性药组及铁棒锤浸膏40mg/kg组均能够显著降低足趾肿胀度(P＜0.05)。
表1 对AA大鼠IL-lβ、TNF-α的影响（略）
与模型组比较▲P＜0.01；与正常对照组比较★P＜0.05
表2 各组AA大鼠左后足趾肿胀度的比较（略）
与模型组比较▲P＜0.05；与正常对照组比较★P＜0.05
3 讨论
铁棒锤是宁夏六盘山区的民间草药，当地群众采挖其块根供药用，因外表黑褐色，形似“棒锤”，俗称“铁棒锤”。主要用于治疗风湿等病症，在民间应用较久。近年来对铁棒锤的研究集中在含量测定［4］、质量标准［5］、野生资源保护［1］等方面。陆满文［6］等采用大鼠蛋清急性关节肿、甲醛慢性关节肿和棉球肉芽肿实验发现铁棒锤总碱有显著的抗炎消肿作用，但未探讨其作用机制，为此，本实验以大鼠佐剂性关节炎为模型，探讨铁棒锤浸膏的抗炎作用及作用机制。研究结果发现，铁棒锤浸膏40mg/kg能明显降低大鼠足趾肿胀度，提示铁棒锤浸膏有抗炎作用。IL-1β是一种促炎细胞因子，它可刺激滑膜引起细胞增生并产生蛋白激酶，在关节软骨破坏中起重要作用。TNF-α与IL-1的效应及靶细胞的范围有很大的相似性，二者常常同时合成或分泌，被称为“姐妹细胞因子”［7-9］。实验结果发现，铁棒锤浸膏40mg/kg有降低IL-lβ、TNF-α等细胞因子的作用。提示铁棒锤浸膏具抗炎作用的机制与降低IL-lβ、TNF-α细胞因子含量有关。教育教学论文发表
【参考文献】
［1］ 李满，杨浩，康建宏，等.宁夏濒危药用植物铁棒锤的资源利用与保护［J］.宁夏农林科技，2007，1：34-35.
［2］ 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(27卷)［M］.北京：科学出版社，1979：318-319.
［3］ 徐叔云，卞如镰.陈修药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1991：723.
［4］ 付雪艳，董琳，张义伟，等.HPLC 法测定铁棒锤中乌头碱的含量［J］.科协论坛，2007，8：456.
［5］ 杨智锋，刘建峰，张红，等.铁棒锤药材质量标准研究［J］.中国中药杂志，2005，30(22)：1771-1773
［6］ 陆满文，韩生银.伏毛铁棒锤药理研究：Ⅲ伏毛铁棒锤生物碱对大白鼠实验性炎症之抗炎症作用［J］.宁夏医科大学学报，1982，(1)：27.
［7］ 苗兵，杨金，周中光，等.伸筋草乙醇提取物对佐剂性关节炎大鼠类风湿因子和血清细胞因子的影响［J］.中医药信息，2008，25(3)：22-24.
［8］ Niki Y，Yamada H，Seki S.Macrophage-andneutrophil-dominant arthritis in human IL-1 alphatransgenicmice［J］.J Clin Invest，2001，107：1127-1135.
教育教学论文发表
［9］ Kontoyiannis D，Pasparakis M，Pizarro TT.Impairedon/off regulation of TNF biosynthesis in mice lacking TNFAU-richelements：implications for joint and gut-associate dimmunopathologies［J］.Immunity，1999，(10)：387-398.
