高效液相色谱法测定产后贴湿巾中咖啡酸的含量
【摘要】 目的 建立以高效液相色谱法测定产后贴湿巾中咖啡酸含量的方法。方法 色谱柱为HangBang C18 (200 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(23∶77)；检测波长为323 nm；流速为1.0 mL/min,进样量为10 μL。结果 咖啡酸检测浓度的线性范围为0.052～0.26 μg(r＝0.999 8)；平均回收率为97.44%(RSD＝0.78%)。结论 本方法操作简便、快速、准确,可用于该制剂的质量控制。
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【关键词】 产后贴湿巾；高效液相色谱法；咖啡酸；含量测定
Key words：Chanhou Tieshijin；HPLC；caffeic acid；content determination
产后贴湿巾(院内制剂)是由蒲公英、乳香、血竭、煅龙骨、红花、赤石脂、冰片等水煎后醇沉,浓缩,用无纺布浸润制成的含药湿巾。每片产后贴湿巾大小为4.5 cm×7 cm,含水量为5 mL,每贴重量为10 g,用于会阴切开缝合术后伤口愈合。本试验研究产后贴湿巾中咖啡酸的含量测定方法,用于其质量控制。现报道如下。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪,Waters2487紫外检测器(美国Waters 515),杭州英谱科技HS色谱数据工作站V4.0+(南京妇幼保健院制剂室)；AE100型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。咖啡酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用,批号110885-200102)；产后贴湿巾为本院制剂(批号为070603、070826、070924、071025)。甲醇为色谱纯,磷酸二氢钠、磷酸为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：HangBang C18(200 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(23∶77)；检测波长为323 nm；流速为1.0 mL/min；进样体积为10 μL,柱温：40 ℃[1]。色谱图见图1。
由图1可知,咖啡酸的保留时间为23 min,咖啡酸与相邻成分杂质峰的分离度为3.4,溶剂甲醇-磷酸盐缓冲液不干扰测定。理论塔板数按咖啡酸峰计算为3 900,拖尾因子为1.25。
2.2 对照品溶液的制备快速论文发表
精密称取在110 ℃干燥至恒重的咖啡酸对照品7.5 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密量取2 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得对照品溶液(每1 mL中含咖啡酸30 μg)。
2.3 供试品溶液与空白辅料溶液的制备
取本品约1 g,精密称定,置50 mL具塞锥形瓶中,精密加5%甲酸的甲醇溶液10 mL,密塞,摇匀,称定重量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz)30 min,取出,放冷,再称定重量,用5%甲酸的甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,离心,取上清液,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,滤液置棕色量瓶中,得供试品溶液。另按处方比例配制不含蒲公英的空白辅料,照上述方法制成空白辅料湿巾。
2.4 标准曲线的绘制
精密称取咖啡酸对照品10.4 mg,置于100 mL容量瓶中,加甲醇适量,超声处理约5 min,溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL,分别置于10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。按“2.1”项下色谱条件分别进样10 μL,以浓度(C)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标进行回归分析,得回归方程：A＝279 255.3C－6 775.0(r＝0.999 8)。结果表明,咖啡酸检测浓度的线性范围为0.052～0.26 μg。
2.5 精密度试验
精密量取对照品溶液10 μL,按“2.1”项下色谱条件重复进样6次。测得咖啡酸峰面积的RSD＝0.25%。
2.6 重复性试验
取同一批样品(批号060220)6份,按“2.1”项下方法操作。咖啡酸的含量平均值为11.78 mg/贴,RSD＝0.94%。表明本方法重复性良好。
2.7 稳定性试验
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精密吸取同一批(批号070603)供试品溶液10 μL,按“2.1”项下色谱条件,分别于0、1、2、4、8、12、18、24、30、36 h进样,测定峰面积。结果RSD＝1.12%,表明供试品溶液在36 h内基本稳定。
2.8 加样回收率试验
取已测得含量的样品(批号070603)5份,精密称定,分别置于25 mL容量瓶中,分别加入对照品适量,按“2.3”项下方法制成溶液,照“2.1”项下色谱条件进样测定,按外标法计算。
结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
2.9 样品测定
取4批样品,根据上述供试品溶液的制备方法及色谱条件,依法测定样品中咖啡酸的含量,每批测定4次,结果见表2。4批样品中含量最高的是070924批号样,为12.42 mg/贴；含量最低的是070826批号样,为11.75 mg/贴；平均值为12.09 mg/贴。表2 咖啡酸含量测定结果(略)
3 讨论
对咖啡酸的提取,本试验采用水、乙醇、甲醇、5%甲酸的甲醇作为溶剂,进行回流、超声振荡提取,结果发现,以5%甲酸的甲醇为提取溶剂,超声振荡提取,测得的咖啡酸峰形良好,含量相差不大,故采用含5%甲酸的甲醇为提取溶剂,超声振荡提取法。
本试验分别采用不同体积的溶剂(10、20、50 mL),超声提取30 min,结果3种体积得到的咖啡酸含量相近,故采用加入10 mL溶剂提取。
本试验分别对超声处理提取时间(30、60、90 min)进行了考察,结果得到的咖啡酸含量相近,为节省时间和能源,故选择超声提取时间为30 min。
取咖啡酸对照品溶液(0.03 mg/mL),从200～400 nm范围内测定紫外吸收光谱图,结果测得最大吸收波长为323 nm,故采用323 nm为检测波长。
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本法具有色谱分离度高、干扰少、易重复等优点,可直接测定咖啡酸的含量,是产后贴湿巾较理想的质量监控方法。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.244－245.
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【关键词】 产后贴湿巾；高效液相色谱法；咖啡酸；含量测定
Key words：Chanhou Tieshijin；HPLC；caffeic acid；content determination
产后贴湿巾(院内制剂)是由蒲公英、乳香、血竭、煅龙骨、红花、赤石脂、冰片等水煎后醇沉,浓缩,用无纺布浸润制成的含药湿巾。每片产后贴湿巾大小为4.5 cm×7 cm,含水量为5 mL,每贴重量为10 g,用于会阴切开缝合术后伤口愈合。本试验研究产后贴湿巾中咖啡酸的含量测定方法,用于其质量控制。现报道如下。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪,Waters2487紫外检测器(美国Waters 515),杭州英谱科技HS色谱数据工作站V4.0+(南京妇幼保健院制剂室)；AE100型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。咖啡酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用,批号110885-200102)；产后贴湿巾为本院制剂(批号为070603、070826、070924、071025)。甲醇为色谱纯,磷酸二氢钠、磷酸为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：HangBang C18(200 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(23∶77)；检测波长为323 nm；流速为1.0 mL/min；进样体积为10 μL,柱温：40 ℃[1]。色谱图见图1。
由图1可知,咖啡酸的保留时间为23 min,咖啡酸与相邻成分杂质峰的分离度为3.4,溶剂甲醇-磷酸盐缓冲液不干扰测定。理论塔板数按咖啡酸峰计算为3 900,拖尾因子为1.25。
2.2 对照品溶液的制备快速论文发表
精密称取在110 ℃干燥至恒重的咖啡酸对照品7.5 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密量取2 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得对照品溶液(每1 mL中含咖啡酸30 μg)。
2.3 供试品溶液与空白辅料溶液的制备
取本品约1 g,精密称定,置50 mL具塞锥形瓶中,精密加5%甲酸的甲醇溶液10 mL,密塞,摇匀,称定重量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz)30 min,取出,放冷,再称定重量,用5%甲酸的甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,离心,取上清液,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,滤液置棕色量瓶中,得供试品溶液。另按处方比例配制不含蒲公英的空白辅料,照上述方法制成空白辅料湿巾。
2.4 标准曲线的绘制
精密称取咖啡酸对照品10.4 mg,置于100 mL容量瓶中,加甲醇适量,超声处理约5 min,溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL,分别置于10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。按“2.1”项下色谱条件分别进样10 μL,以浓度(C)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标进行回归分析,得回归方程：A＝279 255.3C－6 775.0(r＝0.999 8)。结果表明,咖啡酸检测浓度的线性范围为0.052～0.26 μg。
2.5 精密度试验
精密量取对照品溶液10 μL,按“2.1”项下色谱条件重复进样6次。测得咖啡酸峰面积的RSD＝0.25%。
2.6 重复性试验
取同一批样品(批号060220)6份,按“2.1”项下方法操作。咖啡酸的含量平均值为11.78 mg/贴,RSD＝0.94%。表明本方法重复性良好。
2.7 稳定性试验
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精密吸取同一批(批号070603)供试品溶液10 μL,按“2.1”项下色谱条件,分别于0、1、2、4、8、12、18、24、30、36 h进样,测定峰面积。结果RSD＝1.12%,表明供试品溶液在36 h内基本稳定。
2.8 加样回收率试验
取已测得含量的样品(批号070603)5份,精密称定,分别置于25 mL容量瓶中,分别加入对照品适量,按“2.3”项下方法制成溶液,照“2.1”项下色谱条件进样测定,按外标法计算。
结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
2.9 样品测定
取4批样品,根据上述供试品溶液的制备方法及色谱条件,依法测定样品中咖啡酸的含量,每批测定4次,结果见表2。4批样品中含量最高的是070924批号样,为12.42 mg/贴；含量最低的是070826批号样,为11.75 mg/贴；平均值为12.09 mg/贴。表2 咖啡酸含量测定结果(略)
3 讨论
对咖啡酸的提取,本试验采用水、乙醇、甲醇、5%甲酸的甲醇作为溶剂,进行回流、超声振荡提取,结果发现,以5%甲酸的甲醇为提取溶剂,超声振荡提取,测得的咖啡酸峰形良好,含量相差不大,故采用含5%甲酸的甲醇为提取溶剂,超声振荡提取法。
本试验分别采用不同体积的溶剂(10、20、50 mL),超声提取30 min,结果3种体积得到的咖啡酸含量相近,故采用加入10 mL溶剂提取。
本试验分别对超声处理提取时间(30、60、90 min)进行了考察,结果得到的咖啡酸含量相近,为节省时间和能源,故选择超声提取时间为30 min。
取咖啡酸对照品溶液(0.03 mg/mL),从200～400 nm范围内测定紫外吸收光谱图,结果测得最大吸收波长为323 nm,故采用323 nm为检测波长。
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本法具有色谱分离度高、干扰少、易重复等优点,可直接测定咖啡酸的含量,是产后贴湿巾较理想的质量监控方法。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.244－245.
