尿纤溶酶原激活物在乳腺良恶性组织中的表达及意义
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时间：2011年3月28日 10:41
【摘要】 目的：研究乳腺良恶性组织中尿纤溶酶原激活物(uPA)的表达及临床意义。方法：采集乳腺腺瘤23例，乳腺癌109例，利用免疫组织化学方法检测uPA的表达情况。结果：uPA在乳腺癌和乳腺腺瘤中表达率分别为49.54%和21.73%，两组差异有显著性(P<0.05)。浸润性癌组阳性率高于非浸润性癌组(P<0.05)，髓样癌组高于浸润性导管癌组(P<0.05)，有淋巴结转移组阳性率高于无转移组，差异有显著性 (P<0.05)。结论：uPA阳性率与患者病理类型及有无淋巴结转移有关。检测uPA在乳腺癌中表达，可以提示预后并对肿瘤的治疗方案选择有指导作用。
学术论文发表
【关键词】 乳腺肿瘤;腺瘤;尿纤溶酶原激活物;免疫组织化学
【ABSTRACT】 Objective:To investigate the significance of urinary plasminogen activator expression in adenoma and cancer of breast.Methods:uPA was deteced by immunohistochemistry in 109 cases with breast cancer and 23 cases with adenoma.Results:The positive rates of uPA were 49.54%(54/109) and 21.73%(5/23) respectively in breast ancer and adenoma.The positive rates of infiltrating cancer were higher than that of non?invasive carcinoma(P<0.05),the positive rates of medullary carcinoma was higher than that of infitrating ductal carcinoma(P<0.05),the positive rates of lymphatic metastasis were higher than that of Lymph nodes without moving(P<0.05).Conclusion:The positive rates of uPA were associated with age,pathology type and lymph node metastasis.The detemination of uPA might be useful for estimating prognosis and treating breast cancer.
【KEY WORDS】 Breast Neoplasms,Adenoma,Urinary plasminogen activator,Immunohistochemistry
尿纤溶酶原激活物(urinary plasminogen activator,uPA)是一种丝氨酸蛋白水解酶。近年来人们发现uPA的高表达与肿瘤的侵袭和转移有着密切的关系，由于肿瘤细胞能够通过自身分泌的uPA降解基底膜和细胞外基质，破坏其自然屏障作用，从而侵袭周围组织。本研究旨在探讨uPA的表达与乳腺癌病理特性之间的关系及其在肿瘤转移过程中的作用，从而评估乳腺癌生物学行为和寻找治疗乳腺癌的新途径。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集张家口市三所市级医院2003—2007年间乳腺癌手术切除标本109例，乳腺腺瘤23例，全部为女性患者。乳腺癌患者年龄25～79岁，平均年龄49.61岁，中位年龄50岁;乳腺腺瘤患者年龄21～59岁，平均年龄36.87岁，中位年龄38岁。术前均未接受放化疗。
1.2 方法和试剂
鼠抗人uPA血清、SP免疫组化试剂盒及DAB显色剂购自北京中杉金桥生物公司。
按常规将新鲜标本用10%中性甲醛固定24h，石蜡包埋，切片厚度5μm。染色程序按照SP组织化学试剂盒规程进行。阳性对照为已知肺癌切片，阴性对照以PBS替代第Ⅰ抗体。
学术论文发表
1.3 结果判定 高倍镜下(×400)取10个视野，凡uPA阳性细胞(细胞膜和细胞质呈棕黄色)占10%以上者为阳性病例，阳性细胞少于10%为阴性病例。
1.4 统计学方法 组间比较采用χ2检验,P<0.05为组间差异有显著性。
2 结果
免疫组化染色结果显示,uPA阳性着色在癌细胞膜和细胞质内呈棕黄色颗粒,均一弥漫性分布,uPA在乳腺瘤和乳腺癌中阳性率分别为21.73% 和49.54%两者差异有显著性(P<0.05)。uPA表达与年龄和发病部位的关系见表1，与病理类型的关系见表2。表1 uPA在良恶性乳腺肿瘤表达与生物学特性的关系注：与乳腺腺病组相比▲P<0.05表2 uPA表达与乳癌病理类型及转移的相关性注：与浸润小叶癌组相比※P<0.05;与髓样癌组相比△P<0.05;与无淋巴结转移组相比 ▲P<0.05
3 讨论
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率呈逐年上升趋势，其死亡率与癌细胞的侵袭、转移密切相关。而侵袭和转移又是恶性肿瘤的重要生物学特征，有研究表明肿瘤细胞的侵袭和转移是一个多步骤，多环节的复杂过程[1]，其中最重要的一步就是必须穿透一系列的天然组织屏障——基底膜和细胞外基质。而正常基底膜是均一的、连续的结构，由Ⅳ型胶原形成三维网状骨架，上面连接着层粘蛋白(LN)，纤维连接蛋白(EN)等多种糖蛋白成分，正常情况下是不允许任何上皮细胞穿透的，仅在其发生病变或破坏时细胞才能越过基底膜。目前研究表明能有效降解细胞外基质的酶类是包括脯酞酶、丝氨酸蛋白酶等在内的六大酶系，其中uPA属于丝氨酸蛋白酶类。肿瘤细胞分泌的uPA是尿激酶原激活物(pro?uPA)，pro?uPA是活性很低的单链酶原结构，其与细胞膜上的特异性受体(uPA?R)结合而被激活，被激活的uPA可以活化胶原酶，该酶对基质胶原纤维进行分解，同时被激活的uPA也可以直接降解基底膜和细胞外基质成分，为癌细胞迁移创造条件，因此uPA在肿瘤的侵袭和转移中具有重要作用。
uPA基因定位于10号染色体(10q24)，基因名称为PLAU，含有11个外显子和10个内含子，长度6.5kb。基因编码蛋白质uPA是一种含有411个氨基酸残基的丝氨酸蛋白水解酶[2],在正常组织中表达很低,Lotti等[3]和watanabe等[4]报道在机体损伤时uPA可促进细胞移动，皮肤创伤愈合及表皮再生。而在乳腺癌中黄晓曦等[5]研究结果显示uPA抗原高于乳腺良性组织中uPA的水平，并且与肿瘤的侵袭和转移及预后不良有密切联系，本实验也证实了这一点。另外我们的研究也表明：非浸润性癌组uPA阳性率明显低于浸润性癌组(P<0.05),典型髓样癌组和浸润性导管癌组的表达率差别也很大(P<0.05)，说明其生物学特征行为与特定病理类型有一定的相关性。学术论文发表
近年来国内外对uPA的研究结果显示，uPA与癌症的浸润和转移存在相关性[6，7],我们的实验也发现乳腺癌组织中uPA的阳性表达率与年龄、位置无关，与肿瘤有无淋巴结转移密切相关，淋巴结转移组阳性率为58.57%，无淋巴结转移组阳性率为33.33%，差异有显著性 (P<0.05)，这表明uPA在肿瘤的侵袭和转移中起了促进作用，提示检测uPA有助于判断乳腺癌的生物学行为，在临床上可能成为判断预后的指标之一。
多种uPA合成抑制剂能够抑制uPA的表达从而抑制肿瘤的侵袭和转移，并且在肿瘤的治疗中取得了一定的效果[8]。我们相信随着uPA的深入研究将阐明其调控机制和作用机制，有利于人们对乳腺癌的防治以取得更好的疗效。
【参考文献】
1 吴桂株.肿瘤的浸润,转移与UPA系统的关系[J].海峡预防医学杂志,2005,11(2):
2 Duffy MJ,Dugganc M.The urokinase plasminogen activator system:a rich source of tumor markers for the individualized management of patients with cancer[J].Clin Biochem,2004,37(7):541?548
3 Lotti T,Benci M.Plasminogen activators,venous leg ulcers and reepithelialization[J].Int J Dermatol,1995,34(10):696?699
4 Watanabe M,Yano W,Kondo S,et al.Upregulation of urokinase2 type plasminogen activator in corneal epithelial cells induced by wounding[J].Invest Opthalmol Vis Sci,2003,44(8):3332?3338
学术论文发表
5 黄晓曦.乳腺癌组织中uPA的表达及临床意义[J].肿瘤防治杂志,2005,12(16):1224?1247
6 肖继平,张莉.uPA及VEGF在乳腺癌中的表达及意义[J].中国普通外科杂志,2007,16(1):93?96
7 Carriero MV,Franco P,Delvecchio S,et al.Tissue distribution of soluble and receptor ?bound urokinase in human breast cancer using a panel of mono clonal an tibodies[J].Cancer Res,1994,54(20):5445?5454
8 丁友成.uPA合成抑制剂及其在肿瘤治疗中的研究进展[J].国外医学外科分册,2004,31(1):8?11
学术论文发表
【关键词】 乳腺肿瘤;腺瘤;尿纤溶酶原激活物;免疫组织化学
【ABSTRACT】 Objective:To investigate the significance of urinary plasminogen activator expression in adenoma and cancer of breast.Methods:uPA was deteced by immunohistochemistry in 109 cases with breast cancer and 23 cases with adenoma.Results:The positive rates of uPA were 49.54%(54/109) and 21.73%(5/23) respectively in breast ancer and adenoma.The positive rates of infiltrating cancer were higher than that of non?invasive carcinoma(P<0.05),the positive rates of medullary carcinoma was higher than that of infitrating ductal carcinoma(P<0.05),the positive rates of lymphatic metastasis were higher than that of Lymph nodes without moving(P<0.05).Conclusion:The positive rates of uPA were associated with age,pathology type and lymph node metastasis.The detemination of uPA might be useful for estimating prognosis and treating breast cancer.
【KEY WORDS】 Breast Neoplasms,Adenoma,Urinary plasminogen activator,Immunohistochemistry
尿纤溶酶原激活物(urinary plasminogen activator,uPA)是一种丝氨酸蛋白水解酶。近年来人们发现uPA的高表达与肿瘤的侵袭和转移有着密切的关系，由于肿瘤细胞能够通过自身分泌的uPA降解基底膜和细胞外基质，破坏其自然屏障作用，从而侵袭周围组织。本研究旨在探讨uPA的表达与乳腺癌病理特性之间的关系及其在肿瘤转移过程中的作用，从而评估乳腺癌生物学行为和寻找治疗乳腺癌的新途径。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集张家口市三所市级医院2003—2007年间乳腺癌手术切除标本109例，乳腺腺瘤23例，全部为女性患者。乳腺癌患者年龄25～79岁，平均年龄49.61岁，中位年龄50岁;乳腺腺瘤患者年龄21～59岁，平均年龄36.87岁，中位年龄38岁。术前均未接受放化疗。
1.2 方法和试剂
鼠抗人uPA血清、SP免疫组化试剂盒及DAB显色剂购自北京中杉金桥生物公司。
按常规将新鲜标本用10%中性甲醛固定24h，石蜡包埋，切片厚度5μm。染色程序按照SP组织化学试剂盒规程进行。阳性对照为已知肺癌切片，阴性对照以PBS替代第Ⅰ抗体。
学术论文发表
1.3 结果判定 高倍镜下(×400)取10个视野，凡uPA阳性细胞(细胞膜和细胞质呈棕黄色)占10%以上者为阳性病例，阳性细胞少于10%为阴性病例。
1.4 统计学方法 组间比较采用χ2检验,P<0.05为组间差异有显著性。
2 结果
免疫组化染色结果显示,uPA阳性着色在癌细胞膜和细胞质内呈棕黄色颗粒,均一弥漫性分布,uPA在乳腺瘤和乳腺癌中阳性率分别为21.73% 和49.54%两者差异有显著性(P<0.05)。uPA表达与年龄和发病部位的关系见表1，与病理类型的关系见表2。表1 uPA在良恶性乳腺肿瘤表达与生物学特性的关系注：与乳腺腺病组相比▲P<0.05表2 uPA表达与乳癌病理类型及转移的相关性注：与浸润小叶癌组相比※P<0.05;与髓样癌组相比△P<0.05;与无淋巴结转移组相比 ▲P<0.05
3 讨论
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率呈逐年上升趋势，其死亡率与癌细胞的侵袭、转移密切相关。而侵袭和转移又是恶性肿瘤的重要生物学特征，有研究表明肿瘤细胞的侵袭和转移是一个多步骤，多环节的复杂过程[1]，其中最重要的一步就是必须穿透一系列的天然组织屏障——基底膜和细胞外基质。而正常基底膜是均一的、连续的结构，由Ⅳ型胶原形成三维网状骨架，上面连接着层粘蛋白(LN)，纤维连接蛋白(EN)等多种糖蛋白成分，正常情况下是不允许任何上皮细胞穿透的，仅在其发生病变或破坏时细胞才能越过基底膜。目前研究表明能有效降解细胞外基质的酶类是包括脯酞酶、丝氨酸蛋白酶等在内的六大酶系，其中uPA属于丝氨酸蛋白酶类。肿瘤细胞分泌的uPA是尿激酶原激活物(pro?uPA)，pro?uPA是活性很低的单链酶原结构，其与细胞膜上的特异性受体(uPA?R)结合而被激活，被激活的uPA可以活化胶原酶，该酶对基质胶原纤维进行分解，同时被激活的uPA也可以直接降解基底膜和细胞外基质成分，为癌细胞迁移创造条件，因此uPA在肿瘤的侵袭和转移中具有重要作用。
uPA基因定位于10号染色体(10q24)，基因名称为PLAU，含有11个外显子和10个内含子，长度6.5kb。基因编码蛋白质uPA是一种含有411个氨基酸残基的丝氨酸蛋白水解酶[2],在正常组织中表达很低,Lotti等[3]和watanabe等[4]报道在机体损伤时uPA可促进细胞移动，皮肤创伤愈合及表皮再生。而在乳腺癌中黄晓曦等[5]研究结果显示uPA抗原高于乳腺良性组织中uPA的水平，并且与肿瘤的侵袭和转移及预后不良有密切联系，本实验也证实了这一点。另外我们的研究也表明：非浸润性癌组uPA阳性率明显低于浸润性癌组(P<0.05),典型髓样癌组和浸润性导管癌组的表达率差别也很大(P<0.05)，说明其生物学特征行为与特定病理类型有一定的相关性。学术论文发表
近年来国内外对uPA的研究结果显示，uPA与癌症的浸润和转移存在相关性[6，7],我们的实验也发现乳腺癌组织中uPA的阳性表达率与年龄、位置无关，与肿瘤有无淋巴结转移密切相关，淋巴结转移组阳性率为58.57%，无淋巴结转移组阳性率为33.33%，差异有显著性 (P<0.05)，这表明uPA在肿瘤的侵袭和转移中起了促进作用，提示检测uPA有助于判断乳腺癌的生物学行为，在临床上可能成为判断预后的指标之一。
多种uPA合成抑制剂能够抑制uPA的表达从而抑制肿瘤的侵袭和转移，并且在肿瘤的治疗中取得了一定的效果[8]。我们相信随着uPA的深入研究将阐明其调控机制和作用机制，有利于人们对乳腺癌的防治以取得更好的疗效。
【参考文献】
1 吴桂株.肿瘤的浸润,转移与UPA系统的关系[J].海峡预防医学杂志,2005,11(2):
2 Duffy MJ,Dugganc M.The urokinase plasminogen activator system:a rich source of tumor markers for the individualized management of patients with cancer[J].Clin Biochem,2004,37(7):541?548
3 Lotti T,Benci M.Plasminogen activators,venous leg ulcers and reepithelialization[J].Int J Dermatol,1995,34(10):696?699
4 Watanabe M,Yano W,Kondo S,et al.Upregulation of urokinase2 type plasminogen activator in corneal epithelial cells induced by wounding[J].Invest Opthalmol Vis Sci,2003,44(8):3332?3338
学术论文发表
5 黄晓曦.乳腺癌组织中uPA的表达及临床意义[J].肿瘤防治杂志,2005,12(16):1224?1247
6 肖继平,张莉.uPA及VEGF在乳腺癌中的表达及意义[J].中国普通外科杂志,2007,16(1):93?96
7 Carriero MV,Franco P,Delvecchio S,et al.Tissue distribution of soluble and receptor ?bound urokinase in human breast cancer using a panel of mono clonal an tibodies[J].Cancer Res,1994,54(20):5445?5454
8 丁友成.uPA合成抑制剂及其在肿瘤治疗中的研究进展[J].国外医学外科分册,2004,31(1):8?11
