脾肾两助颗粒的药效学研究
【摘要】 目的 观察脾肾两助颗粒对小鼠溃疡性结肠炎模型的影响,为临床用药的有效性提供实验依据。方法 采用番泻叶致小鼠腹泻,观察脾肾两助颗粒对小鼠腹泻的影响；利用三硝基苯磺酸(TNBS)和50%乙醇局部灌肠相结合造成小鼠溃疡性结肠炎模型,观察脾肾两助颗粒对小鼠免疫球蛋白IgG、IgM的影响。结果 脾肾两助颗粒能明显减少番泻叶所致的小鼠腹泻次数,与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.01)；脾肾两助颗粒能降低小鼠IgG、IgM水平。结论 脾肾两助颗粒治疗溃疡性结肠炎疗效显著。
教师职称论文发表
【关键词】 脾肾两助颗粒；溃疡性结肠炎；小鼠
Abstract：Objective To observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets on the ulcerative colitis model, and provide experimental proof for the efficiency of clinical practices. Methods To induce mouse to diarrhea by Fanxieye, then observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets. Ulcerative colitis on mouse was caused by partial bowel-enema of TNBS and 50% ethanol, then observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets on IgG and IgM. Results Spleen-kidney Bi-remedial Pellets was capable to obviously reduce the diarrhea on mouse by Fanxieye, with a remarkable difference to the comparative group (P<0.01). The Spleen-kidney Bi-remedial Pellets decreased the level of IgG and IgM of mouse. Conclusions Spleen-kidney Bi-remedial Pellets has remarkable effect on ulcerative colitis. Key words：Spleen-kidney Bi-remedial Pellets；ulcerative colitis；mice 脾肾两助颗粒是我院用于治疗慢性溃疡性结肠炎(UC)取得较好疗效的中药复方制剂,为了给临床用药提供科学依据,我们对其进行了相关的药效学研究。现报道如下。
1 实验材料
1.1 动物 昆明种小鼠,(20±2)g,♂、♀兼用,普通级,由山西中医药研究院实验动物室提供,1999年引自中国医学科学院实验动物繁育所。动物符合GB-14922-94Ⅱ级标准,动物合格证号：晋动(证)字第A00-001号。
1.2 药物与试剂
脾肾两助颗粒以六君子汤加黄芪、补骨脂、郁金等组成,每克相当于原药材5 g,山西医科大学第二医院中药制剂室提供,批号020309。50%番泻叶煎液、50%乙醇、乙醚,山西医科大学第二医院中药制剂室提供。思密达,博福-益普生(天津)制药集团生产,批号H20000690；柳氮磺吡啶,山西三九同达药业有限公司生产,批号H14022874。脾肾两助颗粒、思密达、柳氮磺吡啶,用蒸馏水配制一定浓度溶液,灌胃备用。三硝基苯磺酸,美国Sigma公司生产,批号042K5002。IgG试剂盒,批号LoNoE110-100-7；IgM试剂盒,批号LoNoE110- 128-11,均由美国Bedlyl公司生产。
1.3 实验条件
室温(22±1)℃,相对湿度(50±5)%。
2 方法和结果
2.1 脾肾两助颗粒对番泻叶所致小鼠腹泻的影响教师职称论文发表
取小鼠50只,♂、♀各半,随机分为5组：空白对照组,脾肾两助颗粒小、中、大剂量组及思密达组,每组10只。用药组按剂量给药,每天2次,连续7 d；除空白对照组外,分别用脾肾两助颗粒0.45、0.9、1.8 g/(kg?d)及思密达1.35 g/(kg?d)灌胃。实验前动物禁食6 h,给药1 h后,空白对照组用同体积蒸馏水灌胃；各组小鼠分别用50%番泻叶煎液0.2 mL/10 g灌胃致泻,用漏斗把小鼠罩在钢丝网上,网下放上滤纸,连续观察3 h,记录小鼠排便次数及稀便腹泻情况(粪便每粒为1次,稀便每堆为1次)。所有数据用SAS8.2统计软件包处理,两组间行方差齐性检验,组间用方差分析,组内用重复测量的方差分析(下同)。结果见表1。 表1 脾肾两助颗粒对番泻叶所致小鼠腹泻的影响（略）注：与空白对照组比较,*P<0.01,**P<0.001,***P<0.0001。
2.2 脾肾两助颗粒对UC小鼠免疫球蛋白指标变化的影响
取小鼠60只,♂、♀各半,随机分为6组：空白对照组、模型对照组、柳氮磺吡啶组及脾肾两助颗粒小、中、大剂量组,每组10只,禁食12 h。用药组按剂量给药,空白对照组用同体积蒸馏水灌胃,每天2次,连续7 d。除空白对照组外,其他各组分别用脾肾两助颗粒0.45、0.9、1.8 g/(kg?d)及柳氮磺吡啶0.9 g/(kg?d)或等容积生理盐水灌胃,1 h后乙醚轻度麻醉小鼠,用直径2 mm的灌肠器从肛门处插入结肠约4 cm处,注入生理盐水或2%三硝基苯磺酸(+50%乙醇)0.1 mL,并保持小鼠水平状态约30 s, 7 d后再次灌入1%三硝基苯磺酸(+50%乙醇)0.1mL。第1次和末次给药30 min后,乙醚轻度麻醉小鼠, 取鼠尾静脉或眼眶静脉丛血20 μL,采用ELISA法测定免疫球蛋白IgG、IgM含量。结果见表2。表2 实验小鼠IgG、IgM指标变化（略）注：与同组治疗前比较,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001；与空白对照组比较,**P<0.001；与模型对照组比较,★P<0.05,★★P<0.01,★★★P<0.001。
3 讨论
现代医学认为,UC发病主要与免疫以及遗传有关,而遗传素质和免疫失调与中医脾肾关系密切。肾藏精,主生殖,先天禀赋差异主要归于肾,而肾特别是肾阳与神经内分泌密切相关；脾为气血生化之源,机体免疫功能与脾的功能状态相关。现代研究表明,通过长期健脾补肾,可以影响神经内分泌免疫系统,调节激素、神经递质、细胞因子的变化与基因表达,从而影响活性物质的释放,改善机体免疫失衡状态[1]。脾肾两助颗粒由黄芪、补骨脂、郁金加六君子汤等组成,全方健脾益气、滋补肝肾,标本兼治,不寒不燥,为治疗慢性泄泻之良方。
现代研究表明：UC的组织学改变显示有B淋巴细胞和T淋巴细胞混合浸润。正常肠组织的淋巴细胞以IgA分泌型B细胞为主,而UC肠组织中IgG分泌型B细胞明显增加。在肠道疾病中,当免疫复合物IgG大量增多或沉淀在肠道中时,造成局部肠黏膜损伤[2]。UC患者在肠黏膜受到炎症侵犯时,其肠黏膜具有多种抗原如结肠上皮细胞抗原、酵母菌抗原、O14型大肠杆菌酯多糖抗原等可能刺激机体免疫B细胞产生IgM。UC患者免疫学检查可见血清免疫球蛋白IgG和IgM在活动期增高[3]。实验给予小鼠脾肾两助颗粒治疗后,其血清IgG和IgM明显下降,提示脾肾两助颗粒可调节机体体液免疫功能,减轻肠道组织损伤。综上而言, 脾肾两助颗粒可以调节UC模型小鼠失衡的免疫水平,减轻自身免疫反应,减少特异性或非特异性炎症分子的释放,缓解肠道免疫破坏作用。
教师职称论文发表
现代中药药理学研究表明,黄芪提取成分F3为免疫增强剂,F2有很强的免疫抑制作用,因此,黄芪具有免疫双向调节作用；六君子汤对肠肌运动具有明显的双向调节作用,对兴奋状态的肠肌运动有抑制能力,对抑制状态的肠肌运动有兴奋功能,能调节免疫功能；补骨脂有细胞毒样作用；郁金对特异性免疫和非特异性免疫均有明显的抑制作用[4]。因此,脾肾两助颗粒治疗溃疡性结肠炎疗效显著。
【参考文献】
1] 阮时宝,吴符火.久泻宁的药效学实验研究[J].中医药学刊,2005, 23(7)：1172－1174.
[2] 李琪佳,徐 敏,张雪怡,等.免疫复合物IgG及补体C30在溃疡性结肠炎免疫发病机制中的作用[J].中国综合临床,2001,17(8)：614.
[3] 王 青,许 琳.溃疡性结肠炎的实验室检查和活动性评估[J].世界华人消化杂志,2000,8(3)：336.
教师职称论文发表
[4] 沈映君.中药药理学[M].北京：人民卫生出版社,2000.880,958,910, 646.
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【关键词】 脾肾两助颗粒；溃疡性结肠炎；小鼠
Abstract：Objective To observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets on the ulcerative colitis model, and provide experimental proof for the efficiency of clinical practices. Methods To induce mouse to diarrhea by Fanxieye, then observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets. Ulcerative colitis on mouse was caused by partial bowel-enema of TNBS and 50% ethanol, then observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets on IgG and IgM. Results Spleen-kidney Bi-remedial Pellets was capable to obviously reduce the diarrhea on mouse by Fanxieye, with a remarkable difference to the comparative group (P<0.01). The Spleen-kidney Bi-remedial Pellets decreased the level of IgG and IgM of mouse. Conclusions Spleen-kidney Bi-remedial Pellets has remarkable effect on ulcerative colitis. Key words：Spleen-kidney Bi-remedial Pellets；ulcerative colitis；mice 脾肾两助颗粒是我院用于治疗慢性溃疡性结肠炎(UC)取得较好疗效的中药复方制剂,为了给临床用药提供科学依据,我们对其进行了相关的药效学研究。现报道如下。
1 实验材料
1.1 动物 昆明种小鼠,(20±2)g,♂、♀兼用,普通级,由山西中医药研究院实验动物室提供,1999年引自中国医学科学院实验动物繁育所。动物符合GB-14922-94Ⅱ级标准,动物合格证号：晋动(证)字第A00-001号。
1.2 药物与试剂
脾肾两助颗粒以六君子汤加黄芪、补骨脂、郁金等组成,每克相当于原药材5 g,山西医科大学第二医院中药制剂室提供,批号020309。50%番泻叶煎液、50%乙醇、乙醚,山西医科大学第二医院中药制剂室提供。思密达,博福-益普生(天津)制药集团生产,批号H20000690；柳氮磺吡啶,山西三九同达药业有限公司生产,批号H14022874。脾肾两助颗粒、思密达、柳氮磺吡啶,用蒸馏水配制一定浓度溶液,灌胃备用。三硝基苯磺酸,美国Sigma公司生产,批号042K5002。IgG试剂盒,批号LoNoE110-100-7；IgM试剂盒,批号LoNoE110- 128-11,均由美国Bedlyl公司生产。
1.3 实验条件
室温(22±1)℃,相对湿度(50±5)%。
2 方法和结果
2.1 脾肾两助颗粒对番泻叶所致小鼠腹泻的影响教师职称论文发表
取小鼠50只,♂、♀各半,随机分为5组：空白对照组,脾肾两助颗粒小、中、大剂量组及思密达组,每组10只。用药组按剂量给药,每天2次,连续7 d；除空白对照组外,分别用脾肾两助颗粒0.45、0.9、1.8 g/(kg?d)及思密达1.35 g/(kg?d)灌胃。实验前动物禁食6 h,给药1 h后,空白对照组用同体积蒸馏水灌胃；各组小鼠分别用50%番泻叶煎液0.2 mL/10 g灌胃致泻,用漏斗把小鼠罩在钢丝网上,网下放上滤纸,连续观察3 h,记录小鼠排便次数及稀便腹泻情况(粪便每粒为1次,稀便每堆为1次)。所有数据用SAS8.2统计软件包处理,两组间行方差齐性检验,组间用方差分析,组内用重复测量的方差分析(下同)。结果见表1。 表1 脾肾两助颗粒对番泻叶所致小鼠腹泻的影响（略）注：与空白对照组比较,*P<0.01,**P<0.001,***P<0.0001。
2.2 脾肾两助颗粒对UC小鼠免疫球蛋白指标变化的影响
取小鼠60只,♂、♀各半,随机分为6组：空白对照组、模型对照组、柳氮磺吡啶组及脾肾两助颗粒小、中、大剂量组,每组10只,禁食12 h。用药组按剂量给药,空白对照组用同体积蒸馏水灌胃,每天2次,连续7 d。除空白对照组外,其他各组分别用脾肾两助颗粒0.45、0.9、1.8 g/(kg?d)及柳氮磺吡啶0.9 g/(kg?d)或等容积生理盐水灌胃,1 h后乙醚轻度麻醉小鼠,用直径2 mm的灌肠器从肛门处插入结肠约4 cm处,注入生理盐水或2%三硝基苯磺酸(+50%乙醇)0.1 mL,并保持小鼠水平状态约30 s, 7 d后再次灌入1%三硝基苯磺酸(+50%乙醇)0.1mL。第1次和末次给药30 min后,乙醚轻度麻醉小鼠, 取鼠尾静脉或眼眶静脉丛血20 μL,采用ELISA法测定免疫球蛋白IgG、IgM含量。结果见表2。表2 实验小鼠IgG、IgM指标变化（略）注：与同组治疗前比较,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001；与空白对照组比较,**P<0.001；与模型对照组比较,★P<0.05,★★P<0.01,★★★P<0.001。
3 讨论
现代医学认为,UC发病主要与免疫以及遗传有关,而遗传素质和免疫失调与中医脾肾关系密切。肾藏精,主生殖,先天禀赋差异主要归于肾,而肾特别是肾阳与神经内分泌密切相关；脾为气血生化之源,机体免疫功能与脾的功能状态相关。现代研究表明,通过长期健脾补肾,可以影响神经内分泌免疫系统,调节激素、神经递质、细胞因子的变化与基因表达,从而影响活性物质的释放,改善机体免疫失衡状态[1]。脾肾两助颗粒由黄芪、补骨脂、郁金加六君子汤等组成,全方健脾益气、滋补肝肾,标本兼治,不寒不燥,为治疗慢性泄泻之良方。
现代研究表明：UC的组织学改变显示有B淋巴细胞和T淋巴细胞混合浸润。正常肠组织的淋巴细胞以IgA分泌型B细胞为主,而UC肠组织中IgG分泌型B细胞明显增加。在肠道疾病中,当免疫复合物IgG大量增多或沉淀在肠道中时,造成局部肠黏膜损伤[2]。UC患者在肠黏膜受到炎症侵犯时,其肠黏膜具有多种抗原如结肠上皮细胞抗原、酵母菌抗原、O14型大肠杆菌酯多糖抗原等可能刺激机体免疫B细胞产生IgM。UC患者免疫学检查可见血清免疫球蛋白IgG和IgM在活动期增高[3]。实验给予小鼠脾肾两助颗粒治疗后,其血清IgG和IgM明显下降,提示脾肾两助颗粒可调节机体体液免疫功能,减轻肠道组织损伤。综上而言, 脾肾两助颗粒可以调节UC模型小鼠失衡的免疫水平,减轻自身免疫反应,减少特异性或非特异性炎症分子的释放,缓解肠道免疫破坏作用。
教师职称论文发表
现代中药药理学研究表明,黄芪提取成分F3为免疫增强剂,F2有很强的免疫抑制作用,因此,黄芪具有免疫双向调节作用；六君子汤对肠肌运动具有明显的双向调节作用,对兴奋状态的肠肌运动有抑制能力,对抑制状态的肠肌运动有兴奋功能,能调节免疫功能；补骨脂有细胞毒样作用；郁金对特异性免疫和非特异性免疫均有明显的抑制作用[4]。因此,脾肾两助颗粒治疗溃疡性结肠炎疗效显著。
【参考文献】
1] 阮时宝,吴符火.久泻宁的药效学实验研究[J].中医药学刊,2005, 23(7)：1172－1174.
[2] 李琪佳,徐 敏,张雪怡,等.免疫复合物IgG及补体C30在溃疡性结肠炎免疫发病机制中的作用[J].中国综合临床,2001,17(8)：614.
[3] 王 青,许 琳.溃疡性结肠炎的实验室检查和活动性评估[J].世界华人消化杂志,2000,8(3)：336.
教师职称论文发表
[4] 沈映君.中药药理学[M].北京：人民卫生出版社,2000.880,958,910, 646.
