舒肝活血化痰方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清瘦素、胰岛素抵抗指数的影响
【摘要】 目的 探讨舒肝活血化痰方对非酒精脂肪性肝炎大鼠胰岛素抵抗(IR)的作用。方法 采用高脂饮食复制高脂血症脂肪性肝炎大鼠模型,用舒肝活血化痰方治疗,以东宝肝泰作对照,观察其对模型大鼠肝功能、血脂、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、血清瘦素(LEP)和胰岛素抵抗指数(FIRI)的影响。结果 舒肝活血化痰方显著改善肝功能(P<0.01或P<0.05),降低血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),同时升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量(P<0.01或P<0.05),并有显著降低肝组织Hyp含量(P<0.05)及血清LEP、FIRI(P<0.01或P<0.05)的作用。结论 舒肝活血化痰方可能通过改善LEP及FIRI,抑制肝脏的脂肪贮积、减轻肝损伤和阻止脂肪性肝纤维化的发生发展。
教师论文发表
【关键词】 脂肪性肝炎；舒肝活血化痰方；胰岛素抵抗；瘦素抵抗
Abstract：Objective To investigate the effects of Shugan Huoxue Huatan Decoction (SHHD) on non-alcoholic steatohepatitis (NASH) of rats. Methods 32 SD male rats were randomly allocated into 4 groups：normal group, model group, Dongbao Gantai (DBG) group, SHHD group. NASH model was induced by hyperlipid diet. General condition and pathological changes of liver tissues were observed. Liver function, blood lipids, liver tissue Hyp and serum LEP were dectected. Fasting insulin resistance index (FIRI) was evaluated according to the levels of fasting blood glucose (FBG) and fasting serum insulin (FINS). Results Compared with model group, SHHD had the effects of improving liver function and blood lipids, decreasing liver tissue Hyp, LEP and FIRI siginificantly. Conclusion Inhibiting leptin and insulin resistances, enhancing the lipid metabolism are probably the main mechanisms of SHHD in preventing and treating NASH. Key words：steatohepatitis；Shugan Huoxue Huatan Decoction；insulin resistance；leptin resistance 目前,由于胰岛素抵抗导致的相关的肥胖、2型糖尿病、高脂血症等代谢紊乱的非酒精因素脂肪性肝病的发病率正逐年上升,非酒精性脂肪性肝病如不及时治疗可在脂肪性肝炎的基础上发展为肝纤维化甚至肝硬化。目前多数学者认为,胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是非酒精性脂肪肝(nonalco-holic fatty liver,NAFL)的共同发病基础[1],瘦素(leptin,LEP)可能通过影响IR 而对NAFL的形成和发展起作用,其与胰岛素抵抗的关系一直是探索的热点[2]。本研究观察舒肝活血化痰方对胰岛素抵抗脂肪性肝炎大鼠血清LEP、胰岛素抵抗指数(FIRI)的影响,探讨其防治大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用机制。
1 实验材料
32只健康雄性SD大鼠,体重(180±20)g,中国科学院上海实验动物中心提供。
中药方由茵陈、郁金、赤芍、柴胡、泽泻、半夏、姜黄、三七参、生山楂等组成,煎成200%浓度的水煎液；东宝肝泰片由吉林通化东宝药业股份有限公司出品,用羧甲基纤维素钠0.2%的混悬液配制东宝肝泰片,浓度为0.08%。
2 实验方法
2.1 分组
分组前,对所购大鼠用普通饲料喂养1周,确认健康后,将32只大鼠称重标记后按随机数字表随机分成4组：正常组、模型组、中药组、东宝肝泰组,每组8只。32只大鼠分笼喂养于8个等大的喂养笼中,每笼4只。
2.2 造模
正常喂养1周后,除正常组外,其余各组大鼠均开始以高脂饲料(由普通饲料加15%猪油、10%蛋黄粉、0.2%胆固醇)喂养,造模至24周处死。
2.3 给药教师论文发表
大鼠喂养高脂饲料21 d后开始治疗：中药组以舒肝活血化瘀方水煎液1 mL/100 g体重灌胃；东宝肝泰组以0.08%的东宝肝泰混悬液1 mL/100 g体重灌胃；正常组、模型组均以0.9%氯化钠溶液1 mL/100 g体重灌胃。
2.4 观察项目及检测
①各组大鼠的体重变化：分别于实验前、实验第4周末(以后每隔2周)至第24周末用电子秤称量各组大鼠的体重；②观察大鼠的精神、运动、饮食、排便、皮毛色泽等情况；③肝功能及血脂检测：包括丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),于大鼠处死前,采取各组大鼠血液并分离血清,采用全自动生化分析仪检测；④肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量：按试剂盒说明操作,用分光光度法检测；⑤血清LEP及定量：采用放射免疫法,按文献[3]方法计算。
2.5 病理学观察
取新鲜肝组织左叶,10%中性福尔马林固定,自动脱水机逐级酒精脱水,二甲苯透明,包埋,4 μm厚切片,用于HE及胶原染色。
2.6 统计学方法
用SPSS11.0统计软件进行分析。
3 结果
3.1 大鼠的一般情况
实验期间正常组大鼠精力充沛,灵活,饮食正常,皮肤有光泽,体重缓慢增加。模型组大鼠造模时体重迅速增加,活泼,粪便粘臭；实验第5周后模型组大鼠活动减少,形体肥胖。中药组及东宝肝泰组体重增加缓慢,状态较模型组好。
3.2 各组大鼠血脂变化
教师论文发表
(见表1)表1 各组大鼠血脂变化情况(略)注：与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01(下同)。
3.3 各组大鼠肝功能变化
(见表2) 表2 各组大鼠肝功能变化情况(略)
3.4 肝脏病理变化
正常组：肝小叶结构正常,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列,无肝细胞肿胀及脂肪变。模型组：大鼠多呈中-重度脂肪肝,出现窦周纤维化,肝小叶结构破坏,大部分肝细胞浆内含大脂滴,少量肝细胞肿胀,部分呈气球样变,不同程度的肝组织坏死,汇管区、肝窦及中央静脉周围可见大量的炎性细胞浸润,大量的假小叶形成。中药组：与模型组相比,肝细胞脂肪变性较轻,炎性细胞浸润较少,偶见点状坏死,纤维化程度减轻。东宝肝泰组：与模型组比较,肝细胞脂肪变性较轻,炎性细胞浸润较少,但是肝纤维化程度仍较重,与肝组织Hyp的结果一致(见表3)。表3 肝组织Hyp含量比较(略)
3.5 各组大鼠血清空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)及FIRI及LEP的变化
(见表4)表4 各组大鼠血清FBG、FINS、FIRI及LEP的变化(略)注：与东宝肝泰组比较,△P<0.05,△△P<0.01。
4 讨论
本实验采用高脂饮食复制非酒精性脂肪性肝炎模型,此造模的方法与人类肥胖合并高脂蛋白血症脂肪肝极为相似,是较为理想的非酒精性脂肪性肝炎模型。研究结果显示,舒肝活血化痰方显著改善肝功能,降低血清TG、TC及LDL-C的同时升高HDL-C含量,并显著降低肝组织Hyp含量,通过显著降低FBS、FINS、FIRI及血清LEP而改善胰岛素及瘦素抵抗,疗效优于东宝肝泰。表明舒肝活血化痰方具有确切的防治高脂血症脂肪性肝炎的功效,且有抗脂肪性肝纤维化的作用。
教师论文发表
非酒精性脂肪性肝炎的病理机制并未完全明了,Day等[4]提出的“二次打击”学说似可以解释其复杂的病理机制。近年来,随着消化、遗传、营养、内分泌、心血管等多学科相关研究的深入,对非酒精性脂肪肝病的病理机制有了更进一步的认识,特别认识到瘦素抵抗及胰岛素抵抗与非酒精性脂肪肝的关系密切。研究表明,肥胖机体过度表达瘦素,在肥胖相关的胰岛素抵抗中起着重要作用,瘦素从不同层次、不同环节干扰胰岛素的生理功能,介导胰岛素抵抗；瘦素能促进内脏脂肪的分解,使游离的脂肪酸浓度增加,一方面干扰肌肉对胰岛素的敏感性,另一方面又使肝脏对胰岛素的灭活能力降低；瘦素能削弱胰岛素的生物效应。肥胖者组织瘦素分泌量的增加本来是一种生理反应,当某些因素使瘦素抵抗现象出现时,瘦素对肥胖个体的生物作用降低,肥胖者肥胖程度加重,导致胰岛素敏感性进一步降低。而且,瘦素调节胰岛素的分泌和组织对胰岛素的反应,瘦素刺激糖原生成,抑制糖原分解,刺激糖异生及糖的转运和更新,与胰岛素营养因子作用相似。它还激活细胞内胰岛素信号发送途径,但也抑制胰岛素刺激的其他信号蛋白的磷酸化,包括胰岛素受体底物21(IRS21),提示瘦素诱导发生胰岛素抵抗[5-6]。高瘦素水平通过胰岛素抵抗和高胰岛素血症,产生与胰岛素相关的肝内脂肪贮积,又通过改变胰岛素信号发送,增加肝细胞内脂酸,使之转变为TG。我们的研究结果表明：模型组大鼠FBG、FINS、FIRI及LEP均显著升高(P<0.01),舒肝活血化痰方可显著降低FBS、FINS、FISI及LEP(P<0.01),说明舒肝活血化痰方可能通过改善瘦素和胰岛素抵抗,抑制肝脏的脂肪贮积、减轻肝损伤和阻止脂肪性肝纤维化的发生发展。
【参考文献】
1] 颜勤明,陈 莹.脂肪肝与胰岛素抵抗的关系[J].实用医学杂志,2004, 20(3)：277－278.
[2] 李芳萍,陈黎红,程 桦,等.血清瘦素水平与胰岛B 细胞功能、胰岛素抵抗的关系[J].新医学,2003,34(2)：74－76.
[3] 钟 岚,范建高,王国良,等.肥胖、高脂血症性脂肪性肝炎模型的建立[J].实验动物科学与管理,2000,17(2)：16－20.
[4] Day CP, James OF. Steatohepatitis：a tale of two“hit”?[J]. Gastroenterology,1998,114(4)：842－845.
[5] Muller G, Ertl J, Gerl M, et al. Leptin impairs metablic actions of insulin in isolated rat adipocytes[J].J Biol Chem,1997, 272(16)：10585－10593.教师论文发表
[6] Kamohara S, Barcelin R, Halaas JL, et al. Acute stimulation of glucosemetabolism in mice by leptin treatment[J].Nature,1997, 389(6649)：374－377.
教师论文发表
【关键词】 脂肪性肝炎；舒肝活血化痰方；胰岛素抵抗；瘦素抵抗
Abstract：Objective To investigate the effects of Shugan Huoxue Huatan Decoction (SHHD) on non-alcoholic steatohepatitis (NASH) of rats. Methods 32 SD male rats were randomly allocated into 4 groups：normal group, model group, Dongbao Gantai (DBG) group, SHHD group. NASH model was induced by hyperlipid diet. General condition and pathological changes of liver tissues were observed. Liver function, blood lipids, liver tissue Hyp and serum LEP were dectected. Fasting insulin resistance index (FIRI) was evaluated according to the levels of fasting blood glucose (FBG) and fasting serum insulin (FINS). Results Compared with model group, SHHD had the effects of improving liver function and blood lipids, decreasing liver tissue Hyp, LEP and FIRI siginificantly. Conclusion Inhibiting leptin and insulin resistances, enhancing the lipid metabolism are probably the main mechanisms of SHHD in preventing and treating NASH. Key words：steatohepatitis；Shugan Huoxue Huatan Decoction；insulin resistance；leptin resistance 目前,由于胰岛素抵抗导致的相关的肥胖、2型糖尿病、高脂血症等代谢紊乱的非酒精因素脂肪性肝病的发病率正逐年上升,非酒精性脂肪性肝病如不及时治疗可在脂肪性肝炎的基础上发展为肝纤维化甚至肝硬化。目前多数学者认为,胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是非酒精性脂肪肝(nonalco-holic fatty liver,NAFL)的共同发病基础[1],瘦素(leptin,LEP)可能通过影响IR 而对NAFL的形成和发展起作用,其与胰岛素抵抗的关系一直是探索的热点[2]。本研究观察舒肝活血化痰方对胰岛素抵抗脂肪性肝炎大鼠血清LEP、胰岛素抵抗指数(FIRI)的影响,探讨其防治大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用机制。
1 实验材料
32只健康雄性SD大鼠,体重(180±20)g,中国科学院上海实验动物中心提供。
中药方由茵陈、郁金、赤芍、柴胡、泽泻、半夏、姜黄、三七参、生山楂等组成,煎成200%浓度的水煎液；东宝肝泰片由吉林通化东宝药业股份有限公司出品,用羧甲基纤维素钠0.2%的混悬液配制东宝肝泰片,浓度为0.08%。
2 实验方法
2.1 分组
分组前,对所购大鼠用普通饲料喂养1周,确认健康后,将32只大鼠称重标记后按随机数字表随机分成4组：正常组、模型组、中药组、东宝肝泰组,每组8只。32只大鼠分笼喂养于8个等大的喂养笼中,每笼4只。
2.2 造模
正常喂养1周后,除正常组外,其余各组大鼠均开始以高脂饲料(由普通饲料加15%猪油、10%蛋黄粉、0.2%胆固醇)喂养,造模至24周处死。
2.3 给药教师论文发表
大鼠喂养高脂饲料21 d后开始治疗：中药组以舒肝活血化瘀方水煎液1 mL/100 g体重灌胃；东宝肝泰组以0.08%的东宝肝泰混悬液1 mL/100 g体重灌胃；正常组、模型组均以0.9%氯化钠溶液1 mL/100 g体重灌胃。
2.4 观察项目及检测
①各组大鼠的体重变化：分别于实验前、实验第4周末(以后每隔2周)至第24周末用电子秤称量各组大鼠的体重；②观察大鼠的精神、运动、饮食、排便、皮毛色泽等情况；③肝功能及血脂检测：包括丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),于大鼠处死前,采取各组大鼠血液并分离血清,采用全自动生化分析仪检测；④肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量：按试剂盒说明操作,用分光光度法检测；⑤血清LEP及定量：采用放射免疫法,按文献[3]方法计算。
2.5 病理学观察
取新鲜肝组织左叶,10%中性福尔马林固定,自动脱水机逐级酒精脱水,二甲苯透明,包埋,4 μm厚切片,用于HE及胶原染色。
2.6 统计学方法
用SPSS11.0统计软件进行分析。
3 结果
3.1 大鼠的一般情况
实验期间正常组大鼠精力充沛,灵活,饮食正常,皮肤有光泽,体重缓慢增加。模型组大鼠造模时体重迅速增加,活泼,粪便粘臭；实验第5周后模型组大鼠活动减少,形体肥胖。中药组及东宝肝泰组体重增加缓慢,状态较模型组好。
3.2 各组大鼠血脂变化
教师论文发表
(见表1)表1 各组大鼠血脂变化情况(略)注：与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01(下同)。
3.3 各组大鼠肝功能变化
(见表2) 表2 各组大鼠肝功能变化情况(略)
3.4 肝脏病理变化
正常组：肝小叶结构正常,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列,无肝细胞肿胀及脂肪变。模型组：大鼠多呈中-重度脂肪肝,出现窦周纤维化,肝小叶结构破坏,大部分肝细胞浆内含大脂滴,少量肝细胞肿胀,部分呈气球样变,不同程度的肝组织坏死,汇管区、肝窦及中央静脉周围可见大量的炎性细胞浸润,大量的假小叶形成。中药组：与模型组相比,肝细胞脂肪变性较轻,炎性细胞浸润较少,偶见点状坏死,纤维化程度减轻。东宝肝泰组：与模型组比较,肝细胞脂肪变性较轻,炎性细胞浸润较少,但是肝纤维化程度仍较重,与肝组织Hyp的结果一致(见表3)。表3 肝组织Hyp含量比较(略)
3.5 各组大鼠血清空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)及FIRI及LEP的变化
(见表4)表4 各组大鼠血清FBG、FINS、FIRI及LEP的变化(略)注：与东宝肝泰组比较,△P<0.05,△△P<0.01。
4 讨论
本实验采用高脂饮食复制非酒精性脂肪性肝炎模型,此造模的方法与人类肥胖合并高脂蛋白血症脂肪肝极为相似,是较为理想的非酒精性脂肪性肝炎模型。研究结果显示,舒肝活血化痰方显著改善肝功能,降低血清TG、TC及LDL-C的同时升高HDL-C含量,并显著降低肝组织Hyp含量,通过显著降低FBS、FINS、FIRI及血清LEP而改善胰岛素及瘦素抵抗,疗效优于东宝肝泰。表明舒肝活血化痰方具有确切的防治高脂血症脂肪性肝炎的功效,且有抗脂肪性肝纤维化的作用。
教师论文发表
非酒精性脂肪性肝炎的病理机制并未完全明了,Day等[4]提出的“二次打击”学说似可以解释其复杂的病理机制。近年来,随着消化、遗传、营养、内分泌、心血管等多学科相关研究的深入,对非酒精性脂肪肝病的病理机制有了更进一步的认识,特别认识到瘦素抵抗及胰岛素抵抗与非酒精性脂肪肝的关系密切。研究表明,肥胖机体过度表达瘦素,在肥胖相关的胰岛素抵抗中起着重要作用,瘦素从不同层次、不同环节干扰胰岛素的生理功能,介导胰岛素抵抗；瘦素能促进内脏脂肪的分解,使游离的脂肪酸浓度增加,一方面干扰肌肉对胰岛素的敏感性,另一方面又使肝脏对胰岛素的灭活能力降低；瘦素能削弱胰岛素的生物效应。肥胖者组织瘦素分泌量的增加本来是一种生理反应,当某些因素使瘦素抵抗现象出现时,瘦素对肥胖个体的生物作用降低,肥胖者肥胖程度加重,导致胰岛素敏感性进一步降低。而且,瘦素调节胰岛素的分泌和组织对胰岛素的反应,瘦素刺激糖原生成,抑制糖原分解,刺激糖异生及糖的转运和更新,与胰岛素营养因子作用相似。它还激活细胞内胰岛素信号发送途径,但也抑制胰岛素刺激的其他信号蛋白的磷酸化,包括胰岛素受体底物21(IRS21),提示瘦素诱导发生胰岛素抵抗[5-6]。高瘦素水平通过胰岛素抵抗和高胰岛素血症,产生与胰岛素相关的肝内脂肪贮积,又通过改变胰岛素信号发送,增加肝细胞内脂酸,使之转变为TG。我们的研究结果表明：模型组大鼠FBG、FINS、FIRI及LEP均显著升高(P<0.01),舒肝活血化痰方可显著降低FBS、FINS、FISI及LEP(P<0.01),说明舒肝活血化痰方可能通过改善瘦素和胰岛素抵抗,抑制肝脏的脂肪贮积、减轻肝损伤和阻止脂肪性肝纤维化的发生发展。
【参考文献】
1] 颜勤明,陈 莹.脂肪肝与胰岛素抵抗的关系[J].实用医学杂志,2004, 20(3)：277－278.
[2] 李芳萍,陈黎红,程 桦,等.血清瘦素水平与胰岛B 细胞功能、胰岛素抵抗的关系[J].新医学,2003,34(2)：74－76.
[3] 钟 岚,范建高,王国良,等.肥胖、高脂血症性脂肪性肝炎模型的建立[J].实验动物科学与管理,2000,17(2)：16－20.
[4] Day CP, James OF. Steatohepatitis：a tale of two“hit”?[J]. Gastroenterology,1998,114(4)：842－845.
[5] Muller G, Ertl J, Gerl M, et al. Leptin impairs metablic actions of insulin in isolated rat adipocytes[J].J Biol Chem,1997, 272(16)：10585－10593.教师论文发表
[6] Kamohara S, Barcelin R, Halaas JL, et al. Acute stimulation of glucosemetabolism in mice by leptin treatment[J].Nature,1997, 389(6649)：374－377.
