宣肺止咳合剂提取工艺研究
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发布者：马国平,刘志辉,钱芳,陆超
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时间：2011年5月05日 14:34
【摘要】 目的 优选宣肺止咳合剂的提取工艺。方法 以盐酸麻黄碱含量、正丁醇萃取得率和水提浸膏得率为指标,采用正交试验法,考察水提的工艺条件：加水量、提取时间、提取次数。结果 最佳提取工艺为：加8倍量水,煎煮2次,每次60 min。结论 本研究试验结果可靠,最佳工艺条件适合批量生产。
学术论文发表
【关键词】 宣肺止咳合剂；盐酸麻黄碱；正交试验；提取工艺
Abstract：Objective To optimize the extraction process of Xuanfei Zhike Mixture. Methods The preparation process was investigated by L9(34) orthogonal design with content of ephedrine hydrochloride, the extraction rate of n-butanol and total extraction as indexes. The main factors influencing the extraction efficiency such as the amount of added water, the time of extraction and times of boiling were investigated. Results The optimum technical condition was as follows：8 times amount of water, extract 2 times and 60 min for each time. Conclusion The result is reliable. It can be used for mass production.
Key words：Xuanfei Zhike Mixture；ephedrine hydrochloride；orthogonal test；extraction process
宣肺止咳合剂由麻黄、桔梗、甘草、远志、桑白皮、炒牛蒡子等组成,具有宣肺利咽、清润止咳之功效,临床用于喉源性咳嗽、过敏性咳嗽及上呼吸道感染、感冒后痒咳等。本研究采用正交试验设计,以确定其最佳提取工艺。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪Agilent 1100,四元泵(G1311A),柱温箱(G1316A),VWD检测器(G1314A),工作站(Chemstation), Agilent手动进样器(10 μL定量环)。1/10万电子分析天平(BP-211D型,德国Sartorius)；KQ-1000E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；101-1A型电热鼓风干燥箱(南通沪通制药机械设备厂)；HH-4数显型恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。
盐酸麻黄碱对照品(含量测定用,批号171242-200405),购自中国药品生物制品检定所。高效液相色谱所用试剂为色谱纯,水为超纯水,其他试剂为分析纯。所用中药材均购自江苏省药材公司,并由本室专家鉴定。
2 方法与结果
学术论文发表
2.1 正交设计
取处方0.5倍量药材,选用正交试验表L9(34),表头设计见表1,三因素分别为加水量、提取时间、提取次数。
2.2 水提取得率
精密吸取各样品溶液2 mL,水浴蒸干,置105 ℃烘箱中干燥3 h,取出,置干燥器中冷却30 min,取出,迅速称重。
2.3 正丁醇萃取得率
精密吸取各样品溶液20 mL,加水饱和的正丁醇萃取3次,每次20 mL,合并萃取液,水浴蒸干,置105 ℃烘箱中干燥3 h,取出,置干燥器中冷却30 min,取出,迅速称重。表1 因素水平表（略）
2.4 盐酸麻黄碱含量测定
2.4.1 色谱条件
色谱柱：Supelco ODS C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(5∶95)[1]；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量10 μL。
2.4.2 对照品溶液的制备及回归方程
精密称取盐酸麻黄碱对照品10.93 mg,用流动相溶解,制成每1 mL含盐酸麻黄碱54.65 μg的对照品溶液。再用流动相分别稀释为27.325、13.662 5、6.831 3、3.415 6、1.707 8 μg/mL的对照品溶液,分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液10 μL,注入高效液相色谱仪中测定。以进样量为横坐标(μg),峰面积积分值(mAu)为纵坐标,经线性回归,得盐酸麻黄碱回归方程：Y＝2 664.2X－1.042,r＝1.000 0。盐酸麻黄碱进样量在0.017 08～0.546 5 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.4.3 供试品溶液的制备
精密吸取正交试验各样品相当于0.4 g麻黄的量,加水至60 mL,置250 mL烧瓶中,加入20%NaOH溶液120 mL,NaCl 7.5 g。加热保持微沸,收集馏出液至预先加入0.5 mol/L稀盐酸5 mL的容量瓶中,收集馏出液约120 mL,再加水定容至200 mL,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,滤液作为供试品溶液。
2.4.4 盐酸麻黄碱含量的测定 学术论文发表
按“2.4.1”项下条件测定盐酸麻黄碱的含量。
2.5 正交试验结果
根据L9(34)正交试验表进行试验,分别测定提取液中盐酸麻黄碱量、正丁醇萃取得率和水提浸膏得率。盐酸麻黄碱量为水煎提取正交试验的主要考核指标,同时将正丁醇萃取得率和水提浸膏得率作为水煎提取正交试验的考核指标,权重系数分别定为0.7、0.2、0.1。把盐酸麻黄碱量(Y1)、正丁醇萃取得率 (Y2)、水提浸膏得率(Y3)最高者定为100,其余按公式Y’1＝Y1i/Y1max×100,Y’2＝Y2i/Y2max×100,Y’3＝Y3i /Y3max×100,计算相应得分,再按公式Y＝0.7Y’1＋0.2Y’2＋0.1Y’3计算综合评分作为筛选指标。结果见表2,方差分析见表3。表2 水煎提取正交试验结果（略）表3 方差分析表（略）注：F0.05(2,2)＝19,F0.1(2,2)＝9
2.6 方差分析
由正交试验结果和方差分析表可以看出,各因素对结果没有显著影响。因素C相对其他因素影响较大,各因素影响次序为C＞A＞B；各因素不同水平的影响次序为A2＞A3＞A1,B3＞B2＞B1,
C3＞C2＞C1,因此,最佳提取工艺为A2B3C3,即每次加水8倍,每次煎煮90 min,煎煮3次。考虑到试验的可行性和从节约能源角度出发,优选最佳工艺为：每次加水8倍,每次煎煮60 min,煎煮2次。
2.7 验证试验
称取与正交试验等量药材,按优选的提取工艺提取,测定各指标成分含量。结果平均浸膏得率为26.38%,平均正丁醇萃取得率为3.52%,盐酸麻黄碱平均含量为7.26 mg,所测得平均盐酸麻黄碱含量、平均浸膏得率和正丁醇萃取得率接近正交最高量,故优选的工艺可行。
3 讨论
通过供试品溶液的制备方法,本试验考察了加入不同量的20%NaOH溶液对同一样品中盐酸麻黄碱含量的影响,结果表明,随着碱加入量的增加,盐酸麻黄碱的含量也增加,当加入120 mL左右20%NaOH溶液时,盐酸麻黄碱的含量达到最大,随着碱加入量的增加,盐酸麻黄碱的含量不再增加,故选择加入20%NaOH溶液120 mL蒸馏。学术论文发表
本试验同时考察了收集馏出液的量,蒸馏液收集至100 mL,已经收集得供试品中95%的盐酸麻黄碱,考虑到测定的准确性和减少误差,收集溜出液至120 mL即可。
由正交试验结果可知,各因素对试验结果没有显著影响,因素B中B2、B1有差异,B2、B3差异较小,因素C中C1、C2差异较大,C2、C3差异较小,故优选B2、C2为最佳提取工艺。验证试验结果表明,优选工艺合理可行。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.211.
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【关键词】 宣肺止咳合剂；盐酸麻黄碱；正交试验；提取工艺
Abstract：Objective To optimize the extraction process of Xuanfei Zhike Mixture. Methods The preparation process was investigated by L9(34) orthogonal design with content of ephedrine hydrochloride, the extraction rate of n-butanol and total extraction as indexes. The main factors influencing the extraction efficiency such as the amount of added water, the time of extraction and times of boiling were investigated. Results The optimum technical condition was as follows：8 times amount of water, extract 2 times and 60 min for each time. Conclusion The result is reliable. It can be used for mass production.
Key words：Xuanfei Zhike Mixture；ephedrine hydrochloride；orthogonal test；extraction process
宣肺止咳合剂由麻黄、桔梗、甘草、远志、桑白皮、炒牛蒡子等组成,具有宣肺利咽、清润止咳之功效,临床用于喉源性咳嗽、过敏性咳嗽及上呼吸道感染、感冒后痒咳等。本研究采用正交试验设计,以确定其最佳提取工艺。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪Agilent 1100,四元泵(G1311A),柱温箱(G1316A),VWD检测器(G1314A),工作站(Chemstation), Agilent手动进样器(10 μL定量环)。1/10万电子分析天平(BP-211D型,德国Sartorius)；KQ-1000E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；101-1A型电热鼓风干燥箱(南通沪通制药机械设备厂)；HH-4数显型恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。
盐酸麻黄碱对照品(含量测定用,批号171242-200405),购自中国药品生物制品检定所。高效液相色谱所用试剂为色谱纯,水为超纯水,其他试剂为分析纯。所用中药材均购自江苏省药材公司,并由本室专家鉴定。
2 方法与结果
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2.1 正交设计
取处方0.5倍量药材,选用正交试验表L9(34),表头设计见表1,三因素分别为加水量、提取时间、提取次数。
2.2 水提取得率
精密吸取各样品溶液2 mL,水浴蒸干,置105 ℃烘箱中干燥3 h,取出,置干燥器中冷却30 min,取出,迅速称重。
2.3 正丁醇萃取得率
精密吸取各样品溶液20 mL,加水饱和的正丁醇萃取3次,每次20 mL,合并萃取液,水浴蒸干,置105 ℃烘箱中干燥3 h,取出,置干燥器中冷却30 min,取出,迅速称重。表1 因素水平表（略）
2.4 盐酸麻黄碱含量测定
2.4.1 色谱条件
色谱柱：Supelco ODS C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(5∶95)[1]；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量10 μL。
2.4.2 对照品溶液的制备及回归方程
精密称取盐酸麻黄碱对照品10.93 mg,用流动相溶解,制成每1 mL含盐酸麻黄碱54.65 μg的对照品溶液。再用流动相分别稀释为27.325、13.662 5、6.831 3、3.415 6、1.707 8 μg/mL的对照品溶液,分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液10 μL,注入高效液相色谱仪中测定。以进样量为横坐标(μg),峰面积积分值(mAu)为纵坐标,经线性回归,得盐酸麻黄碱回归方程：Y＝2 664.2X－1.042,r＝1.000 0。盐酸麻黄碱进样量在0.017 08～0.546 5 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.4.3 供试品溶液的制备
精密吸取正交试验各样品相当于0.4 g麻黄的量,加水至60 mL,置250 mL烧瓶中,加入20%NaOH溶液120 mL,NaCl 7.5 g。加热保持微沸,收集馏出液至预先加入0.5 mol/L稀盐酸5 mL的容量瓶中,收集馏出液约120 mL,再加水定容至200 mL,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,滤液作为供试品溶液。
2.4.4 盐酸麻黄碱含量的测定 学术论文发表
按“2.4.1”项下条件测定盐酸麻黄碱的含量。
2.5 正交试验结果
根据L9(34)正交试验表进行试验,分别测定提取液中盐酸麻黄碱量、正丁醇萃取得率和水提浸膏得率。盐酸麻黄碱量为水煎提取正交试验的主要考核指标,同时将正丁醇萃取得率和水提浸膏得率作为水煎提取正交试验的考核指标,权重系数分别定为0.7、0.2、0.1。把盐酸麻黄碱量(Y1)、正丁醇萃取得率 (Y2)、水提浸膏得率(Y3)最高者定为100,其余按公式Y’1＝Y1i/Y1max×100,Y’2＝Y2i/Y2max×100,Y’3＝Y3i /Y3max×100,计算相应得分,再按公式Y＝0.7Y’1＋0.2Y’2＋0.1Y’3计算综合评分作为筛选指标。结果见表2,方差分析见表3。表2 水煎提取正交试验结果（略）表3 方差分析表（略）注：F0.05(2,2)＝19,F0.1(2,2)＝9
2.6 方差分析
由正交试验结果和方差分析表可以看出,各因素对结果没有显著影响。因素C相对其他因素影响较大,各因素影响次序为C＞A＞B；各因素不同水平的影响次序为A2＞A3＞A1,B3＞B2＞B1,
C3＞C2＞C1,因此,最佳提取工艺为A2B3C3,即每次加水8倍,每次煎煮90 min,煎煮3次。考虑到试验的可行性和从节约能源角度出发,优选最佳工艺为：每次加水8倍,每次煎煮60 min,煎煮2次。
2.7 验证试验
称取与正交试验等量药材,按优选的提取工艺提取,测定各指标成分含量。结果平均浸膏得率为26.38%,平均正丁醇萃取得率为3.52%,盐酸麻黄碱平均含量为7.26 mg,所测得平均盐酸麻黄碱含量、平均浸膏得率和正丁醇萃取得率接近正交最高量,故优选的工艺可行。
3 讨论
通过供试品溶液的制备方法,本试验考察了加入不同量的20%NaOH溶液对同一样品中盐酸麻黄碱含量的影响,结果表明,随着碱加入量的增加,盐酸麻黄碱的含量也增加,当加入120 mL左右20%NaOH溶液时,盐酸麻黄碱的含量达到最大,随着碱加入量的增加,盐酸麻黄碱的含量不再增加,故选择加入20%NaOH溶液120 mL蒸馏。学术论文发表
本试验同时考察了收集馏出液的量,蒸馏液收集至100 mL,已经收集得供试品中95%的盐酸麻黄碱,考虑到测定的准确性和减少误差,收集溜出液至120 mL即可。
由正交试验结果可知,各因素对试验结果没有显著影响,因素B中B2、B1有差异,B2、B3差异较小,因素C中C1、C2差异较大,C2、C3差异较小,故优选B2、C2为最佳提取工艺。验证试验结果表明,优选工艺合理可行。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.211.
