卡瓦脂质体纳米颗粒制备及其稳定性的研究
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时间：2011年3月22日 16:01
【摘要】 目的 制备包载卡瓦的脂质体纳米颗粒并研究其稳定性。方法 采用旋转薄膜蒸发法制备卡瓦纳米制剂，并对其形貌、大小等进行表征，考察纳米颗粒的稳定性。结果 卡瓦脂质体纳米颗粒平均粒径为(99.7±7.6)nm，多分散系数为0.321±0.011，Zeta电位为(-33.9±2.3)mV，包封率为 (83.32±0.34)%;纳米溶液于4℃下放置60d，其纳米粒外观、粒径及包封率无明显变化，差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 卡瓦脂质体纳米颗粒的包封率较高，粒径分布均匀，稳定性良好，为卡瓦的新剂型开发提供了实验依据。
代理发表论文
【关键词】 卡瓦;脂质体;稳定性
Abstract:Objective To prepare the kava?loaded lipid nanoparticles from Piper methysticum and study their stability.Methods Kava?loaded lipid nanoparticles were prepared by rotary?film evaporation method, and their appearance, size and stability were observed.Results Mean size, polydispersity index,Zeta potential, and entrapment efficiency of kava?loaded lipid nanoparticles were 99.7 nm, 0.321,-33.9 mV, and 83.32%, respectively. Their appearance, size and entrapment efficiency showed no obvious changes after storage at 4℃ for 60 days. Conclusion The kava?loaded lipid nanoparticles have high entrapment efficiency, uniform particle size and good stability. The present study provides the experiment evidence for the development of novel dosage form of kava.
Key words: Piper methysticum (kava);lipid;stability
植物提取物卡瓦油是从南太平洋岛屿盛产的胡椒科植物卡瓦(Piper methysticum)的干燥根中提取出来的植物生理活性成分。卡瓦油是一种良好的抗抑郁药，具有镇静催眠、抗真菌、抗血栓生成、抗疲劳、减肥、松弛肌肉等作用，在全球范围内受到广泛的关注[1?2]。但是卡瓦油的水溶性差，生物利用度低，目前尚没有研制出理想的卡瓦药物制剂，严重影响其广泛使用。脂质体纳米颗粒是极具潜力的给药载体，不仅能运载亲油性药物，还能运载亲水性药物，同时还可作为药物的储库，增加药物在皮肤的滞留量和滞留时间[3?4]。脂质体纳米颗粒制备简单，可多途径给药，易于规模化生产。有关卡瓦脂质体纳米颗粒制备及其稳定性研究目前尚未见有关报道，本文以卡瓦油为模型药物来考察脂质体纳米颗粒的制备及其物理稳定性。
1 资料和方法
1.1 一般资料
SPA?400型原子力显微镜(日本精工公司);3000HS型Zetasizer分析仪(英国Malvern公司);vc 130型探头式超声处理机(美国Sonics&Materials公司);DU?800型紫外可见分光光度计 (德国Beckman公司);Re?300型旋转蒸发仪(英国Stuart公司)，卡瓦(陕西三原天域生物制品有限公司提炼厂);大豆磷脂(美国 Avanti公司) ;胆固醇(美国sigma公司);Sephadex G?75(Pharmacia);其余试剂均为分析纯，实验中用水均为超纯水。
1.2 方法代理发表论文
1.2.1 卡瓦脂质体纳米颗粒的制备与表征 参照文献[5] 方法，并加以改进。称取卡瓦油10 mg、胆固醇40 mg、大豆磷脂100 mg置于圆底烧瓶中，加入体积比为5∶1的氯仿与乙醇混合液15mL溶解，于旋转蒸发器上减压蒸发除去氯仿和乙醇。加入60g/L葡萄糖液5 mL作为分散介质，得脂质体初混液，冰水浴超声10 min，制备包载卡瓦的脂质体纳米制剂。取少许颗粒加水混匀稀释，取样滴于云母片上，自然干燥后，利用原子力显微镜表征脂质体纳米颗粒形貌。载药的脂质体纳米颗粒的平均粒径、粒度分布、多分散系数以及Zeta电位通过Malvren Zetasizer 3000HS分析仪测定。
1.2.2 卡瓦脂质体纳米颗粒包封率的测定 (1)紫外光谱扫描：将卡瓦油、卡瓦脂质体纳米颗粒和空白脂质体分别用甲醇?水混合液溶解稀释后，在300～500nm处扫描，卡瓦油、卡瓦脂质体纳米颗粒在360nm处有强吸收，空白脂质体在该波长范围无吸收。(2)标准曲线绘制：用甲醇配制60、50、40、30、20和10μg/mL卡瓦溶液，在 300～500nm处扫描，以360nm处的吸光度值及对应的浓度线性回归，绘制标准曲线。(3)包封率测定：移取卡瓦纳米制剂1mL过Sephadex G?75柱分离(以超纯水为洗脱剂)，收集脂质体馏分，加入甲醇溶解并定容，测定吸光度值(条件同标准曲线)，计算卡瓦含量。另取对应的卡瓦纳米制剂1mL直接加入甲醇溶解后测定卡瓦的含量。两者相除得包封率。
1.2.3 稳定性实验考察 将制备的卡瓦脂质体纳米颗粒于4℃密封储存60d。每隔20d检查纳米制剂的外观形态、平均粒径、Zeta电位、多分散指数和包封率。
1.3 统计学处理
数据以均数±标准差
2 结果
2.1 卡瓦脂质体纳米颗粒的特性表征代理发表论文
本文制备的卡瓦脂质体纳米颗粒为浅黄色的物质，Zeta电位为(-33.9±2.3)mV，脂质体纳米颗粒的原子力图见图1，制备出来的脂质体纳米颗粒都为较完整的球形，分散性好，颗粒粒径较均匀。颗粒的平均粒径为(99.7±7.6)nm，多分散系数为0.321±0.011，粒径分布如图2 所示，粒径分布范围较窄，粒径分布范围为(13～199)nm，其中小于67nm占97%，颗粒大小基本上与原子力图吻合。
图1 卡瓦脂质体纳米颗粒的原子力图
2.2 包封率
2.2.1 标准曲线 不同浓度卡瓦溶液对应的吸收光谱如图3所示。以360nm处吸光度值(A)及对应的浓度(c)作线性回归，绘制标准曲线，见图4，标准曲线回归方程为：c(μg/mL)=50.3A-0.0196，γ=0.9993。
图2 卡瓦脂质体纳米颗粒的粒径分布图 图3 不同浓度的卡瓦溶液对应吸收光谱图 图4 卡瓦标准曲线
2.2.2 包封率测定 脂质体纳米颗粒对脂溶性药物的包封率较高，达到(83.32±0.34)%。
2.3 稳定性检测
卡瓦脂质体纳米颗粒以葡萄糖水溶液为分散介质，在4℃条件下放置60d后未见分层、絮凝，外观和色泽均无明显变化。卡瓦脂质体纳米颗粒储存 20、40及60d后，平均粒径、Zeta电位、多分散指数和包封率4个检测指标的检测结果与保存前无明显区别，差异表1 卡瓦脂质体纳米颗粒稳定性检测结果均无统计学意义(P>0.05)，这说明卡瓦脂质体纳米颗粒在较长的时间内能保持良好的稳定性。
3 讨论代理发表论文
脂质体纳米颗粒是一类极具开发潜力的药物载体,其突出的优越性越来越为制剂学界所关注，已广泛应用于肿瘤治疗、基因治疗、眼部疾病治疗等诸多医学领域[4]。但脂质体纳米颗粒用于植物提取物制剂的开发研究鲜见报道。脂质体纳米颗粒有双分子层所形成的疏水腔和亲水性外帽，可将难溶于水的药物以纳米级包埋于脂质体的疏水腔内，极大提高了药物的溶解度[4?5]。卡瓦具有较强的亲脂性，以脂质体作为载体将其包裹于脂质体纳米颗粒的疏水腔内，制成的纳米制剂能有效增强其在水中的溶解度。本研究制备的卡瓦纳米制剂性质优良，包封率高，放置60d后纳米粒外观、粒径、多分散指数及包封率无明显变化，具有良好的稳定性，为难溶于水的植物提取物卡瓦开发理想新型载体提供了实验依据。
【参考文献】
[1] Xuan T D, Fukuta M, Wei A C, et al. Efficacy of extracting solvents to chemical components of kava (Piper methysticum) roots[J]. Nat Med, 2008, 62(2): 188?194.
[2] Sorrentino L, Capasso A, Schmidt M. Safety of ethanolic kava extract: Results of a study of chronic toxicity in rats. [J]. Phytomedicine, 2006, 13(8): 542?549.
[3] 蔡明志,王昆,黄复生,等.载药脂质体物理化学稳定性的研究进展[J]. 国外医学药学分册，2005，32(6)：404?407.
[4] 蒋正立,朱萍. 纳米脂质体研究新进展[J]. 海峡药学，2008，20(11)：5?7.
[5] 顾宜,石玉,张三奇,等. 大黄素纳米脂质体的制备和质量评价[J]. 第四军医大学学报，2003, 24 (5): 479.
代理发表论文
[6] 易承学,余江南,徐希明,等. 纳米药物载体在中药制剂研发中的应用[J]. 中国中药杂志， 2008, 33 (16): 1936?1940.
代理发表论文
【关键词】 卡瓦;脂质体;稳定性
Abstract:Objective To prepare the kava?loaded lipid nanoparticles from Piper methysticum and study their stability.Methods Kava?loaded lipid nanoparticles were prepared by rotary?film evaporation method, and their appearance, size and stability were observed.Results Mean size, polydispersity index,Zeta potential, and entrapment efficiency of kava?loaded lipid nanoparticles were 99.7 nm, 0.321,-33.9 mV, and 83.32%, respectively. Their appearance, size and entrapment efficiency showed no obvious changes after storage at 4℃ for 60 days. Conclusion The kava?loaded lipid nanoparticles have high entrapment efficiency, uniform particle size and good stability. The present study provides the experiment evidence for the development of novel dosage form of kava.
Key words: Piper methysticum (kava);lipid;stability
植物提取物卡瓦油是从南太平洋岛屿盛产的胡椒科植物卡瓦(Piper methysticum)的干燥根中提取出来的植物生理活性成分。卡瓦油是一种良好的抗抑郁药，具有镇静催眠、抗真菌、抗血栓生成、抗疲劳、减肥、松弛肌肉等作用，在全球范围内受到广泛的关注[1?2]。但是卡瓦油的水溶性差，生物利用度低，目前尚没有研制出理想的卡瓦药物制剂，严重影响其广泛使用。脂质体纳米颗粒是极具潜力的给药载体，不仅能运载亲油性药物，还能运载亲水性药物，同时还可作为药物的储库，增加药物在皮肤的滞留量和滞留时间[3?4]。脂质体纳米颗粒制备简单，可多途径给药，易于规模化生产。有关卡瓦脂质体纳米颗粒制备及其稳定性研究目前尚未见有关报道，本文以卡瓦油为模型药物来考察脂质体纳米颗粒的制备及其物理稳定性。
1 资料和方法
1.1 一般资料
SPA?400型原子力显微镜(日本精工公司);3000HS型Zetasizer分析仪(英国Malvern公司);vc 130型探头式超声处理机(美国Sonics&Materials公司);DU?800型紫外可见分光光度计 (德国Beckman公司);Re?300型旋转蒸发仪(英国Stuart公司)，卡瓦(陕西三原天域生物制品有限公司提炼厂);大豆磷脂(美国 Avanti公司) ;胆固醇(美国sigma公司);Sephadex G?75(Pharmacia);其余试剂均为分析纯，实验中用水均为超纯水。
1.2 方法代理发表论文
1.2.1 卡瓦脂质体纳米颗粒的制备与表征 参照文献[5] 方法，并加以改进。称取卡瓦油10 mg、胆固醇40 mg、大豆磷脂100 mg置于圆底烧瓶中，加入体积比为5∶1的氯仿与乙醇混合液15mL溶解，于旋转蒸发器上减压蒸发除去氯仿和乙醇。加入60g/L葡萄糖液5 mL作为分散介质，得脂质体初混液，冰水浴超声10 min，制备包载卡瓦的脂质体纳米制剂。取少许颗粒加水混匀稀释，取样滴于云母片上，自然干燥后，利用原子力显微镜表征脂质体纳米颗粒形貌。载药的脂质体纳米颗粒的平均粒径、粒度分布、多分散系数以及Zeta电位通过Malvren Zetasizer 3000HS分析仪测定。
1.2.2 卡瓦脂质体纳米颗粒包封率的测定 (1)紫外光谱扫描：将卡瓦油、卡瓦脂质体纳米颗粒和空白脂质体分别用甲醇?水混合液溶解稀释后，在300～500nm处扫描，卡瓦油、卡瓦脂质体纳米颗粒在360nm处有强吸收，空白脂质体在该波长范围无吸收。(2)标准曲线绘制：用甲醇配制60、50、40、30、20和10μg/mL卡瓦溶液，在 300～500nm处扫描，以360nm处的吸光度值及对应的浓度线性回归，绘制标准曲线。(3)包封率测定：移取卡瓦纳米制剂1mL过Sephadex G?75柱分离(以超纯水为洗脱剂)，收集脂质体馏分，加入甲醇溶解并定容，测定吸光度值(条件同标准曲线)，计算卡瓦含量。另取对应的卡瓦纳米制剂1mL直接加入甲醇溶解后测定卡瓦的含量。两者相除得包封率。
1.2.3 稳定性实验考察 将制备的卡瓦脂质体纳米颗粒于4℃密封储存60d。每隔20d检查纳米制剂的外观形态、平均粒径、Zeta电位、多分散指数和包封率。
1.3 统计学处理
数据以均数±标准差
2 结果
2.1 卡瓦脂质体纳米颗粒的特性表征代理发表论文
本文制备的卡瓦脂质体纳米颗粒为浅黄色的物质，Zeta电位为(-33.9±2.3)mV，脂质体纳米颗粒的原子力图见图1，制备出来的脂质体纳米颗粒都为较完整的球形，分散性好，颗粒粒径较均匀。颗粒的平均粒径为(99.7±7.6)nm，多分散系数为0.321±0.011，粒径分布如图2 所示，粒径分布范围较窄，粒径分布范围为(13～199)nm，其中小于67nm占97%，颗粒大小基本上与原子力图吻合。
图1 卡瓦脂质体纳米颗粒的原子力图
2.2 包封率
2.2.1 标准曲线 不同浓度卡瓦溶液对应的吸收光谱如图3所示。以360nm处吸光度值(A)及对应的浓度(c)作线性回归，绘制标准曲线，见图4，标准曲线回归方程为：c(μg/mL)=50.3A-0.0196，γ=0.9993。
图2 卡瓦脂质体纳米颗粒的粒径分布图 图3 不同浓度的卡瓦溶液对应吸收光谱图 图4 卡瓦标准曲线
2.2.2 包封率测定 脂质体纳米颗粒对脂溶性药物的包封率较高，达到(83.32±0.34)%。
2.3 稳定性检测
卡瓦脂质体纳米颗粒以葡萄糖水溶液为分散介质，在4℃条件下放置60d后未见分层、絮凝，外观和色泽均无明显变化。卡瓦脂质体纳米颗粒储存 20、40及60d后，平均粒径、Zeta电位、多分散指数和包封率4个检测指标的检测结果与保存前无明显区别，差异表1 卡瓦脂质体纳米颗粒稳定性检测结果均无统计学意义(P>0.05)，这说明卡瓦脂质体纳米颗粒在较长的时间内能保持良好的稳定性。
3 讨论代理发表论文
脂质体纳米颗粒是一类极具开发潜力的药物载体,其突出的优越性越来越为制剂学界所关注，已广泛应用于肿瘤治疗、基因治疗、眼部疾病治疗等诸多医学领域[4]。但脂质体纳米颗粒用于植物提取物制剂的开发研究鲜见报道。脂质体纳米颗粒有双分子层所形成的疏水腔和亲水性外帽，可将难溶于水的药物以纳米级包埋于脂质体的疏水腔内，极大提高了药物的溶解度[4?5]。卡瓦具有较强的亲脂性，以脂质体作为载体将其包裹于脂质体纳米颗粒的疏水腔内，制成的纳米制剂能有效增强其在水中的溶解度。本研究制备的卡瓦纳米制剂性质优良，包封率高，放置60d后纳米粒外观、粒径、多分散指数及包封率无明显变化，具有良好的稳定性，为难溶于水的植物提取物卡瓦开发理想新型载体提供了实验依据。
【参考文献】
[1] Xuan T D, Fukuta M, Wei A C, et al. Efficacy of extracting solvents to chemical components of kava (Piper methysticum) roots[J]. Nat Med, 2008, 62(2): 188?194.
[2] Sorrentino L, Capasso A, Schmidt M. Safety of ethanolic kava extract: Results of a study of chronic toxicity in rats. [J]. Phytomedicine, 2006, 13(8): 542?549.
[3] 蔡明志,王昆,黄复生,等.载药脂质体物理化学稳定性的研究进展[J]. 国外医学药学分册，2005，32(6)：404?407.
[4] 蒋正立,朱萍. 纳米脂质体研究新进展[J]. 海峡药学，2008，20(11)：5?7.
[5] 顾宜,石玉,张三奇,等. 大黄素纳米脂质体的制备和质量评价[J]. 第四军医大学学报，2003, 24 (5): 479.
代理发表论文
[6] 易承学,余江南,徐希明,等. 纳米药物载体在中药制剂研发中的应用[J]. 中国中药杂志， 2008, 33 (16): 1936?1940.
