抗角蛋白抗体定量分析对类风湿关节炎诊断及病情评估的探讨
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发布者：冯秀媛 宫怡 王永福 竺红 张玉蓉
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时间：2011年1月21日 13:13
【摘要】 目的：通过观察抗角蛋白抗体(AKA)滴度与临床和实验室指标及手和腕关节X线片分期的关系，研究AKA定量分析在诊断类风湿关节炎（RA）中的临床意义。方法：研究对象分RA组 、非RA组，采用间接免疫荧光法检测血清AKA，速率散射比浊法检测类风湿因子（RF）；对AKA进行定量分析，观察AKA滴度与临床和实验室指标及手和腕关节X线片分期的关系。结果：RA组AKA阳性者AKA滴度分布以1∶10和1∶20为主；从临床效果进行评价，血清稀释度1∶10为对RA诊断的最佳阳性界值点，且特异度随血清稀释度的增加而增高；AKA阳性RA患者AKA滴度对数值与疾病病程、手和腕关节X线片分期、RF浓度呈正相关。结论：RA患者AKA定量分析结果显示滴度分布以1∶10和1∶20为主；从临床效果进行评价，血清稀释度1∶10为对RA诊断的最佳阳性界值点；血清稀释度越高，特异度越强。AKA滴度与RA患者的病情严重程度和疾病活动度呈正相关。
代发表职称论文
【关键词】 类风湿关节炎；抗角蛋白抗体；定量分析
Abstract Objective：To study the significance of quantitative analysis of anti-keratin antibody (AKA) in rheumatoid arthritis (RA)by observing the relationship of AKA titer with clinical manifestation，lab findings and different hand and wrist X-ray stage.Methods：AKA was detected by IIF (indirect immunofluorescence) and RF was detected by rate nephelometry in 53 RA patients and 62 other internal disease controls. Quantitative analysis of AKA titer was performed, the relationship of AKA titer with clinical manifestation，lab findings and different hand and wrist X-ray stage was compared. Results：In AKA positive RA patients, AKA titer mainly distributed at the 1∶10 and 1∶20 threshold；Serum dilution 1∶10 is the best positive differential point based on the clinical effects;the diagnostic specificity of AKA improved with the increasing of serum dilution.In AKA positive RA patients, AKA titer was positively correlated with the disease course, hand and wrist X-ray stage and RF level, but had no obvious relation with other factors. Conclusions：AKA quantitative analysis shows AKA titer mainly distributes at the 1∶10 and 1∶20 threshold;Serum dilution 1∶10 is the best positive differential point based on the clinical effects; and the diagnostic specificity of AKA improved with the increasing of serum dilution. AKA titer may be positively correlated with disease severity and activity.
代发表职称论文
Key words Rheumatoid arthritis; Anti-keratin antibody; Quantitative analysis
类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种以慢性进行性关节病变为主的全身性自身免疫病，寻找特异性检测指标对RA进行早期诊断已成为近年来RA研究的热点[1]。抗角蛋白抗体 (anti-keratin antibody, AKA)是1979年Young等[2]人以Wistar大鼠食管组织为底物，用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence, IIF）检测患者血清时发现的一种对RA特异的与角质层成分反应的IgG型抗体。本研究旨在探讨AKA定量分析对RA诊断及病情评估的应用价值。
1 对象与方法
1.1 研究对象
RA组53例，系2004年7月至2005年1月宁夏医学院附属医院风湿免疫科门诊及住院的RA患者，符合1987年美国风湿病协会（ARA）修订的RA诊断分类标准[1]。其中男性14例，女性39例，男∶ 女＝1∶2.8；年龄17～80岁，平均49.96岁。非RA组62例，系同期宁夏医学院附属医院内科进行AKA检测的、以国际诊断标准[1]排除RA的其它疾病住院患者；其中男性13例，女性49例，男∶女＝1∶3.8；年龄17～82岁，平均43.39岁；两组研究对象年龄、性别具可比性。
1.2 主要仪器
80℃低温冰箱（日本三洋），荧光显微镜（Olympus BX60），Array-360特种蛋白全自动分析仪（美国Beckman），Beckman Coulter LH 750 Analyzer，离心机（北京医用离心机厂生产LD 4－2）。
1.3 研究方法
IIF法检测AKA，试剂来源于德国欧蒙医学实验诊断有限公司。在AKA定性检测中出现阳性者，进一步倍比稀释血清至1∶20、1∶40、 1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280或直至检测结果为阴性。速率散射比浊法检测RF，试剂来源于美国Beckman公司。
1.4观察指标 代发表职称论文
记录RA患者的一般情况（年龄、疾病病程）、临床指标（有无晨僵、有无手关节畸形、握拳程度、疼痛关节数、压痛关节数、肿胀关节数）和实验室指标（AKA滴度、RF浓度、CRP、ESR、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、Hb、WBC、PLT、NE%），计算疾病活动性评分（Disease Activity Score-28, DAS28）[3]，RA患者摄双手正位片。非RA组记录AKA检测结果。
1.5 统计学处理
所有数据全部录入计算机，采用SPSS 11.5统计软件进行统计分析。采用四格表计算抗体的敏感度和特异度；引入受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve, ROC曲线）判断AKA检测的最佳阳性界值点；AKA滴度与各临床和实验室指标之间的相互关系采用Spearman相关性分析。所有假设检验的检验水准定为α＝0.05。
2 结果
血清不同稀释度定为判断AKA的阳性界限时AKA检测结果见表1。表1血清不同稀释度定为阳性界限时AKA检测结果（略）
从临床效果进行评价，对血清不同稀释度定为判断AKA的阳性界限时AKA检测对RA诊断的敏感度和特异度引入ROC曲线，结果显示血清稀释度1∶10为AKA检测对RA诊断的最佳阳性界值点，见图1。
AKA滴度对数值与病人特征及各检查、检测结果的相关性分析见表2。代发表职称论文
3 讨论
本实验结果显示，以不同血清稀释度作为判断AKA的阳性界限时，血清稀释度越高，AKA阳性的例数越少。本研究通过引入ROC曲线，对血清不同稀释度时 AKA检测对RA诊断的临床效果进行评价，结果显示血清稀释度1∶10为兼顾AKA检测对RA诊断敏感度和特异度的最佳阳性界值点。表2RA组AKA阳性者AKA滴度对数值与病人特征及各指标相关性分析结果（略）
有实验表明AKA对RA诊断的特异度与其血清稀释度有一定关系，1∶10作为阳性界限时特异度为96.5%, 1∶40时达100%，建议AKA检测时亦应报告滴度大小，以便能够作出更加肯定的诊断[4]。本实验结果与之一致，AKA检测对RA诊断的特异度随血清稀释度的增加而增高，以1∶10定为阳性界限时，AKA特异度为96.8%，非RA组有2例AKA阳性，一例诊断为系统性红斑狼疮，另一例诊断为多发性肌炎；以1∶20定为阳性界限时，AKA特异度已达100%，提示AKA定量分析有利于疾病的诊断和鉴别诊断。
国外对67例RA患者(40% IgG型AKA阳性)2年的随访研究发现AKA阳性患者较阴性患者，无论是在临床、实验室、还是X线检查方面都具有更强的疾病活动过程，并发现抗体的滴度变化与疾病活动相平行，认为检测IgG型AKA对RA具有诊断和判断预后的作用[5]。
本实验通过Spearman相关性分析发现AKA滴度对数值与患者疾病病程、双手和腕关节X线片分期、RF浓度呈正相关且有统计学意义，与DAS28呈一定程度的正相关，与Hb水平呈一定程度的负相关；与年龄、有无晨僵、有无手关节畸形、握拳程度、疼痛关节数、压痛关节数、肿胀关节数及CRP、ESR、 IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、WBC、PLT、NE%检测值水平无明显关系，提示AKA滴度与RA的病情严重程度、疾病活动度以及关节侵蚀程度密切相关。
综上所述，我们认为从临床效果进行评价，血清稀释度1∶10为对RA诊断的最佳阳性界值点；AKA对RA诊断的特异度与其血清稀释度有一定关系，血清稀释度越高，特异度越强，对RA患者进行AKA定量分析有助于疾病的诊断和鉴别诊断。AKA滴度水平与RA病情严重程度和疾病活动度相关，高滴度的AKA预示着RA的放射学破坏较严重，因此，建议在临床工作中对AKA进行定量分析，有利于RA的早期诊断、鉴别诊断、病情监测和指导治疗。
代发表职称论文
【参考文献】
[1] 施桂英.关节炎概要 [M].2版.北京：中国医药科技出版社，2005：300-384.
[2] Young BJ,Mallya RK, Leslie RD, et al. Anti-keratin antibodies in rheumatoid arthritis[J].Br Med J, 1979,2(6182):97-99.
[3] Jaap Fransen,Gerold Stucki,Piet LCM van Riel. Rheumatoid Arthritis Measures[J].Arthritis Rheumatism,2003,49(5s):214-224.
[4] 李素萍,崔艳丽,刘文超.类风湿因子和抗角蛋白抗体测定对类风湿性关节炎的诊断价值[J].陕西医学杂志, 2002,31(10):918-920.
[5] Paimela L, Gripenberg M, Kurki P, et al. Antikeratin antibodies : diagnostic and prognostic markers for early rheumatoid arthritis[J].Ann Rheum Dis,1992,51(12):743-746.
代发表职称论文
【关键词】 类风湿关节炎；抗角蛋白抗体；定量分析
Abstract Objective：To study the significance of quantitative analysis of anti-keratin antibody (AKA) in rheumatoid arthritis (RA)by observing the relationship of AKA titer with clinical manifestation，lab findings and different hand and wrist X-ray stage.Methods：AKA was detected by IIF (indirect immunofluorescence) and RF was detected by rate nephelometry in 53 RA patients and 62 other internal disease controls. Quantitative analysis of AKA titer was performed, the relationship of AKA titer with clinical manifestation，lab findings and different hand and wrist X-ray stage was compared. Results：In AKA positive RA patients, AKA titer mainly distributed at the 1∶10 and 1∶20 threshold；Serum dilution 1∶10 is the best positive differential point based on the clinical effects;the diagnostic specificity of AKA improved with the increasing of serum dilution.In AKA positive RA patients, AKA titer was positively correlated with the disease course, hand and wrist X-ray stage and RF level, but had no obvious relation with other factors. Conclusions：AKA quantitative analysis shows AKA titer mainly distributes at the 1∶10 and 1∶20 threshold;Serum dilution 1∶10 is the best positive differential point based on the clinical effects; and the diagnostic specificity of AKA improved with the increasing of serum dilution. AKA titer may be positively correlated with disease severity and activity.
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Key words Rheumatoid arthritis; Anti-keratin antibody; Quantitative analysis
类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种以慢性进行性关节病变为主的全身性自身免疫病，寻找特异性检测指标对RA进行早期诊断已成为近年来RA研究的热点[1]。抗角蛋白抗体 (anti-keratin antibody, AKA)是1979年Young等[2]人以Wistar大鼠食管组织为底物，用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence, IIF）检测患者血清时发现的一种对RA特异的与角质层成分反应的IgG型抗体。本研究旨在探讨AKA定量分析对RA诊断及病情评估的应用价值。
1 对象与方法
1.1 研究对象
RA组53例，系2004年7月至2005年1月宁夏医学院附属医院风湿免疫科门诊及住院的RA患者，符合1987年美国风湿病协会（ARA）修订的RA诊断分类标准[1]。其中男性14例，女性39例，男∶ 女＝1∶2.8；年龄17～80岁，平均49.96岁。非RA组62例，系同期宁夏医学院附属医院内科进行AKA检测的、以国际诊断标准[1]排除RA的其它疾病住院患者；其中男性13例，女性49例，男∶女＝1∶3.8；年龄17～82岁，平均43.39岁；两组研究对象年龄、性别具可比性。
1.2 主要仪器
80℃低温冰箱（日本三洋），荧光显微镜（Olympus BX60），Array-360特种蛋白全自动分析仪（美国Beckman），Beckman Coulter LH 750 Analyzer，离心机（北京医用离心机厂生产LD 4－2）。
1.3 研究方法
IIF法检测AKA，试剂来源于德国欧蒙医学实验诊断有限公司。在AKA定性检测中出现阳性者，进一步倍比稀释血清至1∶20、1∶40、 1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280或直至检测结果为阴性。速率散射比浊法检测RF，试剂来源于美国Beckman公司。
1.4观察指标 代发表职称论文
记录RA患者的一般情况（年龄、疾病病程）、临床指标（有无晨僵、有无手关节畸形、握拳程度、疼痛关节数、压痛关节数、肿胀关节数）和实验室指标（AKA滴度、RF浓度、CRP、ESR、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、Hb、WBC、PLT、NE%），计算疾病活动性评分（Disease Activity Score-28, DAS28）[3]，RA患者摄双手正位片。非RA组记录AKA检测结果。
1.5 统计学处理
所有数据全部录入计算机，采用SPSS 11.5统计软件进行统计分析。采用四格表计算抗体的敏感度和特异度；引入受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve, ROC曲线）判断AKA检测的最佳阳性界值点；AKA滴度与各临床和实验室指标之间的相互关系采用Spearman相关性分析。所有假设检验的检验水准定为α＝0.05。
2 结果
血清不同稀释度定为判断AKA的阳性界限时AKA检测结果见表1。表1血清不同稀释度定为阳性界限时AKA检测结果（略）
从临床效果进行评价，对血清不同稀释度定为判断AKA的阳性界限时AKA检测对RA诊断的敏感度和特异度引入ROC曲线，结果显示血清稀释度1∶10为AKA检测对RA诊断的最佳阳性界值点，见图1。
AKA滴度对数值与病人特征及各检查、检测结果的相关性分析见表2。代发表职称论文
3 讨论
本实验结果显示，以不同血清稀释度作为判断AKA的阳性界限时，血清稀释度越高，AKA阳性的例数越少。本研究通过引入ROC曲线，对血清不同稀释度时 AKA检测对RA诊断的临床效果进行评价，结果显示血清稀释度1∶10为兼顾AKA检测对RA诊断敏感度和特异度的最佳阳性界值点。表2RA组AKA阳性者AKA滴度对数值与病人特征及各指标相关性分析结果（略）
有实验表明AKA对RA诊断的特异度与其血清稀释度有一定关系，1∶10作为阳性界限时特异度为96.5%, 1∶40时达100%，建议AKA检测时亦应报告滴度大小，以便能够作出更加肯定的诊断[4]。本实验结果与之一致，AKA检测对RA诊断的特异度随血清稀释度的增加而增高，以1∶10定为阳性界限时，AKA特异度为96.8%，非RA组有2例AKA阳性，一例诊断为系统性红斑狼疮，另一例诊断为多发性肌炎；以1∶20定为阳性界限时，AKA特异度已达100%，提示AKA定量分析有利于疾病的诊断和鉴别诊断。
国外对67例RA患者(40% IgG型AKA阳性)2年的随访研究发现AKA阳性患者较阴性患者，无论是在临床、实验室、还是X线检查方面都具有更强的疾病活动过程，并发现抗体的滴度变化与疾病活动相平行，认为检测IgG型AKA对RA具有诊断和判断预后的作用[5]。
本实验通过Spearman相关性分析发现AKA滴度对数值与患者疾病病程、双手和腕关节X线片分期、RF浓度呈正相关且有统计学意义，与DAS28呈一定程度的正相关，与Hb水平呈一定程度的负相关；与年龄、有无晨僵、有无手关节畸形、握拳程度、疼痛关节数、压痛关节数、肿胀关节数及CRP、ESR、 IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、WBC、PLT、NE%检测值水平无明显关系，提示AKA滴度与RA的病情严重程度、疾病活动度以及关节侵蚀程度密切相关。
综上所述，我们认为从临床效果进行评价，血清稀释度1∶10为对RA诊断的最佳阳性界值点；AKA对RA诊断的特异度与其血清稀释度有一定关系，血清稀释度越高，特异度越强，对RA患者进行AKA定量分析有助于疾病的诊断和鉴别诊断。AKA滴度水平与RA病情严重程度和疾病活动度相关，高滴度的AKA预示着RA的放射学破坏较严重，因此，建议在临床工作中对AKA进行定量分析，有利于RA的早期诊断、鉴别诊断、病情监测和指导治疗。
代发表职称论文
【参考文献】
[1] 施桂英.关节炎概要 [M].2版.北京：中国医药科技出版社，2005：300-384.
[2] Young BJ,Mallya RK, Leslie RD, et al. Anti-keratin antibodies in rheumatoid arthritis[J].Br Med J, 1979,2(6182):97-99.
[3] Jaap Fransen,Gerold Stucki,Piet LCM van Riel. Rheumatoid Arthritis Measures[J].Arthritis Rheumatism,2003,49(5s):214-224.
[4] 李素萍,崔艳丽,刘文超.类风湿因子和抗角蛋白抗体测定对类风湿性关节炎的诊断价值[J].陕西医学杂志, 2002,31(10):918-920.
[5] Paimela L, Gripenberg M, Kurki P, et al. Antikeratin antibodies : diagnostic and prognostic markers for early rheumatoid arthritis[J].Ann Rheum Dis,1992,51(12):743-746.
