藕节炭中3-表白桦脂酸含量的测定

【摘要】  目的 建立藕节炭中3-表白桦脂酸含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱：Lichrospher C18 (4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.2%冰醋酸(75∶25),流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：207 nm。结果 3-表白桦脂酸的进样量在0.365 4～3.654 μg范围内线性关系良好,r＝0.999 6,平均回收率为98.83%,RSD＝2.47%。不同地区市售藕节炭中3-表白桦脂酸的含量最高为0.575 8%,最低为0.048 3%。结论 本法简便、准确、重复性好,可作为藕节炭中3-表白桦脂酸的含量测定方法。论文发表网

【关键词】  藕节炭；3-表白桦脂酸；高效液相色谱法；含量测定
   
　　 Abstract：Objective To establish a method for the content determination of 3-epibetulinic acid in Nodus Nelumbinis Rhizomatis Charcoal. Methods HPLC was used on Lichrospher C18 column (4.6 mm×150 mm, 5 μm) with mobile phase of acetonitrile-0.2% glacial acetic acid (75∶25), the flow rate of 1 mL/min, the column temperature of 30 ℃ and the detection wavelength of 207 nm. Results 3-epibetulinic acid has a good linearity within 0.365 4～3.654 0 μg (r＝0.999 6) and the average recovery was 98.83% with RSD＝2.47%. The content of 3-epibetulinic acid in Nodus Nelumbinis Rhizomatis Charcoal from different region varied from 0.048 3% to 0.575 8%. Conclusion This method is simple, accurate, with good reproducibility, and can be used for the content determination of 3-epibetulinic acid in Nodus Nelumbinis Rhizomatis Charcoal.
 
　　Key words：Nodus Nelumbinis Rhizomatis Charcoal；3-epibetulinic acid；HPLC；content determination
 
    藕节为睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)的干燥根茎节部,具有止血、消瘀的作用,用于治疗吐血、咯血、尿血、衄血、崩漏。2005年版《中华人民共和国药典》(一部)记载藕节的加工炮制方法为加工制成藕节炭,但藕节炭的质量标准比较简单,仅有加工程度的描述[1]。经研究,3-表白桦脂酸为从藕节炭止血活性部位醋酸乙酯部分中分离得到的主要成分,因此,本试验参考文献[2],以3-表白桦脂酸为指标,采用高效液相色谱(HPLC)法,测定了各地市售藕节炭中的含量,为制定藕节炭的质量控制方法提供参考。

　　1  仪器与试药

    高效液相色谱仪(美国Waters公司),泵Waters 2695,检测器为Waters2996二极管阵列检测器,数据处理器为Waters empower工作站。超纯水(Millipore公司纯水器),乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。3-表白桦脂酸对照品由本课题组从藕节炭中分离制得,高效液相归一化法测定纯度为98.57%。藕节炭样品为从全国不同地区收集的市售藕节炭,粉碎过50目筛备用。
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　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

    色谱柱：Lichrospher C18(4.6 mm×150 mm,5 μm,江苏汉邦科技有限公司)；流动相：乙腈-0.2%冰醋酸(75∶25)；流速：1 mL/min；检测波长：207 nm；进样量：10 μL；柱温：30 ℃。理论塔板数按3-表白桦脂酸计算为11 012,分离度为2.47。色谱图见图1。

　　2.2  供试品溶液的制备

    取不同地区市售藕节炭样品1.0 g,精密称定,精密加入甲醇25 mL,称定重量,回流提取0.5 h,再称定重量,以甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液以0.45 μm滤膜滤过,作为供试品溶液。

　　2.3  对照品溶液的制备

    精密称取3-表白桦脂酸对照品11.42 mg于25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,浓度为0.456 8 mg/mL,作为对照品储备液。精密量取4 mL于10 mL的量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液,浓度为0.182 7 mg/mL。

　　2.4  线性关系考察

    精密吸取对照品溶液(0.182 7 mg/mL)2、5、10、15、20 μL,按上述色谱条件测定峰面积积分值,对所得数据进行回归分析,回归方程为：Y＝527 405X－444 417,r＝0.999 6。表明3-表白桦脂酸进样量在0.365 4～3.654 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

　　2.5  精密度试验

    精密吸取建联藕节炭供试品溶液10 μL,连续进样5次,测定峰面积积分值,结果RSD＝0.556%。精密度良好。
2.6  稳定性试验

    精密吸取济南建联的藕节炭供试品溶液10 μL,每隔2 h进样测定1次,共进样测定5次,结果RSD＝0.727%。其峰面积积分值在测定时间8 h内基本不变,表明在8 h内稳定性良好。论文发表网

　　2.7  重复性试验

    取同一批济南建联藕节炭1.0 g,共取6份,精密称定,按含量测定项下方法,依法测定并计算3-表白桦脂酸的含量,结果其含量为(0.420 0±0.005 52)%,RSD＝1.31%。表明重复性良好。

　　2.8  加样回收率试验

    取同一批济南建联藕节炭0.5 g,精密称定,共取6份,分别加入3-表白桦脂酸2.278 mg,按“2.2”项下方法制得回收率试验液,依法测定。结果平均回收率为98.83%,RSD＝2.47%。结果见表1。表1  加样回收率试验结果（略）

　　2.9  样品测定
  
　　取不同地区市售藕节炭1.0 g,每批取3份,分别精密称定,按上述色谱条件依法测定3-表白桦脂酸的含量。结果见表2。表2  含量测定结果(略)

　　3  讨论

    试验中对加入甲醇的量、提取时间进行了比较研究,加入甲醇25 mL易于过滤操作,且其测定值在线性范围考察内,故选择了25 mL。对回流提取的时间(0.5、1 h)进行比较,结果测得二者的含量基本接近,因此选择提取0.5 h。
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    3-表白桦脂酸为从藕节炭止血活性部位中分离得到的主要化学成分,因此,以3-表白桦脂酸为指标对藕节炭的含量测定进行了研究,但其是否具有止血作用有待研究。
  
　　不同地区市售藕节炭从性状观察上看有较大差异,收集的样品中仅福州市藕节炭为斜片状,其3-表白桦脂酸的含量最低,其他样品均为原药材直接加工炒制而成,这与加工方法及产地是否有关尚待进一步研究。本方法准确、灵敏、专属性强、重复性好,可作为藕节炭中3-表白桦脂酸的含量测定方法。

【参考文献】
  　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.264－265.

　　[2] 赖 玲,杨 光,易 军.RP-HPLC法测定几种中药饮片和制剂中白桦脂酸的含量[J].药物分析杂志,2006,26(8)：1153－1155.

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