人肾透明细胞癌中EGFRvⅢ的表达及意义

【摘要】  目的 检测表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)在肾透明细胞癌组织中的表达，探讨其与肾透明细胞癌发生、发展的关系。方法 采用免疫组织化学染色和图像分析法检测80例肾透明细胞癌和24例正常肾组织中EGFRvⅢ的表达水平，进行统计学分析、比较。结果 肾透明细胞癌组织和正常肾组织EGFRvⅢ的表达阳性率分别为46%、8%。通过半定量分析，二者EGFRvⅢ平均灰度值分别为148.49±13.05 和155.65±14.86，其差异具有统计学意义(t=2.13, P=0.04)；男、女患者EGFRvⅢ的平均灰度值分别为149.01±13.70和147.40±11.76，二者无显著性差异(t=0.54, P=0.59)；EGFRvⅢ表达与年龄无显著相关性(r=0.01, P=0.92)。结论 EGFRvIII在肾透明细胞癌组织中存在高表达，与肾透明细胞癌的发生、发展有一定关系。怎么发表论文

【关键词】  表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)；肾透明细胞癌；免疫组织化学；图像分析
　　ABSTRACT: Objective  To detect expression of epidermal growth factor receptor variant Ⅲ (EGFRvⅢ) in human suprarenal epithelioma to explore its relation with the genesis and development of suprarenal epithelioma. Methods  Immunohistochemistry and pathologic image analysis were used to semiquantitatively detect the expression of EGFRvⅢ protein in eighty human suprarenal epithelioma tissues and twenty-four normal renal tissues. Results  Positive expression rate of EGFRvⅢ was 46% in human suprarenal epithelioma tissues and 8% in normal renal tissues. Their average gray scale values were 148.49±13.05 and 155.65±14.86, respectively, which showed a significant difference (t=2.13, P=0.04). There was no obvious difference between males and females (149.01±13.70 and 147.40±11.76, t=0.54, P=0.59). No significant association was observed between EGFRvⅢ expression and age (r=0.01, P=0.92). Conclusion  Many human suprarenal epithelioma tissues express EGFRvⅢ. EGFRvⅢ may play certain role in the genesis and development of human suprarenal epithelioma.怎么发表论文

　　KEY WORDS: epidermal growth factor receptor variant Ⅲ (EGFRvⅢ); suprarenal epithelioma; immunohistochemistry; image analysis

　　肾癌是目前泌尿外科中常见的恶性肿瘤，而肾透明细胞癌占肾癌的70%-80%，它的发生与发展受到多种基因的调控。表皮生长因子受体Ⅲ型突变体 (epidermal growth factor receptor variant Ⅲ, EGFRvⅢ)是表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)最常见的突变类型，与恶性肿瘤的发生发展有密切关系。本研究通过观察EGFRvⅢ在人肾透明细胞癌组织中的表达情况，探讨其与肾透明细胞癌发生发展的关系和临床意义。

　　1  材料与方法

　　1.1  标本来源

　　收集我院2004-2006年手术切除的肾透明细胞癌标本80例，男54例，女26例，年龄26-78岁，中位年龄53.5岁；另取24例正常肾组织作对照。每例组织标本均经过临床病理确诊。

　　1.2  试剂与仪器
 
　　EGFRvⅢ单克隆抗体为美国Zymed公司产品，1∶100稀释后作为Ⅰ抗(抗体效价为 2×102)，生物素Ⅱ抗及DAB显色系统购自武汉博士德生物公司。采用免疫组织化学SABC法进行染色。利用Leica Q570c真彩图像分析仪(德国)及Nikon Eclipse E1000采图摄像系统(日本)对染色组织进行图像分析。

　　1.3  免疫组化染色及图像分析

　　免疫组化采用SABC法，石蜡切片常规脱蜡，梯度乙醇脱水，3%(体积分数)H2O2室温灭活30 min，微波抗原修复，正常山羊血清封闭30 min，加入Ⅰ抗4 ℃过夜，滴加Ⅱ抗，DAB显色、脱水、透明、封片。用已知的阳性切片作为阳性对照，用PBS代替Ⅰ抗作为阴性对照。怎么发表论文

　　1.4  结果判定

　　显微镜下观察，以肿瘤细胞膜或胞质着色棕黄色或棕褐色者为阳性细胞。以每张切片中随机5个高倍镜(×40)视野阳性细胞数≥10%为阳性切片，<10%或未着色者为阴性。每例标本在光镜下随机选择3个高倍视野，采用病理图像分析系统测量每个视野灰度值，计算平均灰度值。灰度值越高表明相应蛋白表达越低，反之则表明相应蛋白表达越高。

　　1.5  统计学分析

　　采用SPSS 12.0统计软件中的t检验和Spearman相关分析对实验所得计数和计量结果进行分析，以P<0.05为差异有统计学意义。怎么发表论文
2  结 果

　　2.1  免疫组化检测结果

　　EGFRvⅢ主要定位于胞膜和胞质，阳性细胞呈散在或片状分布的棕黄色或棕褐色颗粒，阴性细胞未见明显着色(图1)。肾透明细胞癌组织及正常肾组织EGFRvⅢ的表达情况见表1。表1  肾透明细胞癌及正常肾组织中EGFRvⅢ的表达情况（略）怎么发表论文

　　2.2  病理图像分析结果

　　利用图像分析系统检测肾透明细胞癌和正常肾组织中EGFRvⅢ表达的平均灰度值，通过方差分析和t检验显示肾透明细胞癌EGFRvⅢ的表达较高，差异有统计学意义(P<0.05)。此外，依据性别分组，男、女患者EGFRvⅢ表达水平差异无统计学意义(P>0.05，表2)。表 2  肾癌和正常肾组织EGFRvⅢ表达的灰度值的比较（略）
  
　　采用Spearman等级相关分析法分析肾透明细胞癌组织EGFRvⅢ表达水平与年龄的关系，结果显示二者无显著相关性(rs=0.01, P=0.92)。

　　3  讨论

    EGFR是表皮生长因子酪氨酸激酶受体中erbB家族中的重要成员，与肿瘤的发生发展有着密切关系。进一步研究证实，EGFR的表达不很稳定，常常出现基因的扩增和重排，导致基因突变使得肿瘤细胞表面的抗原表型发生改变，其中最常见的突变类型为EGFRvⅢ［1］。丧失了胞外配体结合区的EGFRvⅢ可以在没有配体结合的情况下组成性激活酪氨酸激酶，产生自体磷酸化，诱发下游信号传导途径，引起级联反应，促进细胞增殖并抑制凋亡［2］。EGFRvⅢ的产生能使肿瘤细胞表型发生转化，表现为细胞活力增加，致瘤性和侵袭力增强，更容易发生早期转移［3-4］。由于EGFRvⅢ高表达于恶性肿瘤细胞，正常组织检测不到，因而成为恶性肿瘤特异性诊断和靶向治疗的理想位点，也是判断细胞表型向恶性转化的重要指标。许多种恶性肿瘤中均高表达EGFRvⅢ，其中包括成胶质细胞瘤(41%)［5］、肝细胞癌(62%) ［6］、非小细胞肺癌(39%)［7］、乳腺癌(68%)［8］等。有关EGFRvⅢ在肾透明细胞癌中表达的研究国内外尚未见相关报道。怎么发表论文

　　本研究结果显示，有53%的肾透明细胞癌患者EGFRvⅢ表达阳性，正常肾组织EGFRvⅢ的表达率和表达水平明显低于癌组织。由此提示，EGFRvⅢ可能参与肾透明细胞癌的发生、发展。流行病学研究显示，肾透明细胞癌男性发病率是女性的两倍，各个年龄段均可发病，多见于40-60岁。本研究纳入的肾透明细胞癌患者中男性54例，女性26例，其EGFRvⅢ表达水平无显著性差异。此外，EGFRvⅢ表达水平与年龄间亦无相关性。由此表明，EGFRvⅢ的表达与性别和年龄无明显关系。
  
　　综上所述，EGFRvⅢ作为EGFR的突变类型，可能与肾透明细胞癌的发生、发展存在一定关系，其高表达可能参与细胞表型转化和恶性肿瘤的形成。

【参考文献】
  　　［1］Sihto H, Puputti M, Pulli L, et al. Epidermal growth factor receptor domain Ⅱ, Ⅳ, and kinase domain mutations in human solid tumors ［J］. J Mol Med, 2005, 83(12):976-983.

　　［2］Moscatello DK, Holgado M, Emlet DR, et al. Constitutive activation of phosphatidylinositol3-kinase by a natureally occurring mutant epidermal growth factor receptor ［J］. J Biol Chem, 1998, 273(1):200-206.

　　［3］Ning Y, Zeineldin R, Liu Y, et al. Down-regulation of integrin alpha2 surface expression by mutant epidermal growth factor receptor (EGFRvⅢ) induces aberrant cell spreading and focal adhesion formation ［J］. Cancer Res, 2005; 65(20):9280-9286.

　　［4］Damstrup L, Wandahl RM, Bastholm L, et al. Epidermal growth factor receptor mutation type transfected into a small cell lung cancer cell line is predominantly localized at the cell surface and enhances the malignanpheno type ［J］. Int J Cancer, 2002, 97(1):7-14.

　　［5］Aldape KD, Ballman K, Furth A, et al. Immunohistochemical detection of EGFRvIII in high malignancy grade astrocytomas and evaluation of prognostic significance ［J］. J Neuropathol Exp Neurol, 2004, 63(7):700-707.

　　［6］欧超，吴飞翔，罗元，等. 表皮生长因子受体III型突变体在肝细胞癌中的表达及意义 ［J］. 癌症, 2005, 24(2):166-169.

　　［7］Okamoto I, Kenyon LC, Emlet DR, et al. Expression of constitutively activated EGFRvⅢ in non-small cell lung cancer ［J］. Cancer Sci, 2003, 94(1):50-56.

　　［8］Ge H, Gong X, Tang CK. Evidence of high incidence of EGFRvⅢ expression and coexpression with EGFR in human invasive breast cancer by laser capture microdissection and immunohistochemical analysis ［J］. Int J Cancer, 2002, 98(3):357-361.

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