大肠癌组织中真核细胞起始因子4E的表达及其意义
【摘要】 目的 探讨真核细胞起始因子4E(eIF4E)在大肠癌组织中的表达，eIF4E与大肠癌发生、发展、临床病理特征及预后间的关系。方法 采用免疫组化法检测60例大肠癌组织中eIF4E的表达情况，以癌旁正常组织和大肠腺瘤各20例作对照。结果 大肠癌组织、癌旁正常组织和大肠腺瘤组织中eIF4E阳性表达率分别为91.7％、10％和90%，eIF4E阳性表达在不同性别、年龄、腺瘤史及肿瘤家族史患者间未见统计学意义，不同肿瘤部位、大小及分化程度、临床分期及有无淋巴结转移的eIF4E阳性表达差异也未见统计学意义(P＞0.05)，但肿瘤浸润深度不同eIF4E阳性表达不同(P＜0.05)。结论 大肠癌组织中存在着eIF4E蛋白高表达现象，eIF4E阳性表达与患者性别、年龄、腺瘤史、肿瘤家族史、病变部位、肿瘤大小、病理分化程度、临床分期及淋巴结转移无关，与浸润深度有关(P＜0.05)。发表论文期刊网
【关键词】 大肠癌；真核细胞起始因子4E；免疫组织化学
Expression of eIF4E in Human Colorectal Cancer
(The Affiliated Hospital of Ningxia Medical College，Yinchuan 750004)
Abstract：Objective To study the expression of Eukaryotic Initiation Factor 4E(eIF4E)in human colorectal cancer and its relationship to clinical pathologic feature.Methods The express of eIF4E in 60 cases with colorectal cancer were examined by immunohistochemical assay.The normal tissue of adjacent to cancer and large intestine adenomas(20 cases)were served as a contral group.Results The positive expression rates of eIF4E in the colorectal cancer tissues，the normal tissues of adjacent to cancer，and the large intestine adenoma tissues were 91.7%，10%，and 90% respectively.Compared colorectal cancer tissue with the normal tissue of adjacent to cancer，there was a significant difference(P＜0.05)；compared large intestine adenoma tissue with the normal tissue of adjacent to cancer，there was a significant difference(P＜0.05)；The positive expression was associated with invasiveness depth，but not related to patients' gender，age，profession，family history，location of cancer，tumor size，histological differentiation，lymph node metastasis and Dukes'stage.Conclusion eIF4E was over-expressed in colorectal cancer.
Key words：colorectal cancer；eIF4E；immunohistochemistry
近年来，真核细胞起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)与肿瘤的关系日益受到重视。eIF4E即mRNA帽结合蛋白，在蛋白质合成的起始阶段起重要调控作用，是蛋白质合成的限速因子，参与细胞生长调节，并具有抗凋亡活性［1-4］。有关eIF4E在大肠癌方面的研究尚少，本研究通过检测eIF4E在大肠癌组织中的表达情况，探讨其在大肠癌发生、发展中的作用。
1 资料与方法
发表论文期刊网
1.1 临床资料
宁夏医学院附属医院2001—2003年收住且随访资料完整60例大肠癌患者，均经病理组织学确诊。其中男36例，女24例，年龄26～74岁，中位年龄56岁。有肿瘤家族史7例，大肠腺瘤病史 10例。肿瘤部位：直肠21例，乙状结肠12例，升结肠17例，横结肠3例，降结肠7例。组织学类型按WHO国际肿瘤学分类标准，其中：低分化腺癌17 例，高中分化腺癌43例。浸润深度：浆膜内9例，浆膜外51例。肿瘤大小：最长径≤5cm者32例，＞5cm者28例。按我国大肠癌Dukes分期标准进行临床分期：A期6例，B期33例，C期11例，D期10例。术后发现有淋巴结转移16例，无淋巴结转移44例；远处转移9例。根治性切除50例，姑息性切除10例。根治术后出现复发转移12例。所有患者术前均未接受化疗、放疗或针对肿瘤的非手术治疗。病例均随访2年以上，随访率100%；尚存活46例，死亡14例。取癌旁正常组织和大肠息肉各20例作为对照。
1.2 方法
兔抗人eIF4E多克隆抗体购于CST公司，DAB及免疫组化Elivision plus广谱试剂盒均购于福州迈新生物技术开发有限公司。所有标本经10％福尔马林固定，石蜡包埋、连续切片4μm厚，脱蜡水化。经微波炉热修复和 3％H2O2处理后，加eIF4E抗体4℃过夜。PBS洗片后加入第二抗体室温下孵育30min。PBS洗片后加入DAB显色液，光学显微镜显色，苏木素复染，脱水，封片。用PBS液代替一抗作阴性对照，用已知的肺癌阳性片作阳性对照。
1.3 结果判断
eIF4E定位于细胞浆，以细胞浆中出现棕黄色颗粒，而背景清晰为阳性。高倍镜下取10个不同视野，每个视野计数100个细胞，取平均值。结合阳性细胞所占百分比和染色强度进行半定量分析［5］：染色强度按下列标准评定：阴性为0分，π淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；染色的阳性细胞所占百分比评定：阴性为0分，阳性细胞数≤25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％为3分，＞75％为4分。综合染色细胞百分比及染色强度分为三级：0～3分为阴性表达(-)；≥4分为阳性表达(＋)。
1.4 统计学方法
数据处理采用SPSS 13.0统计软件，χ2检验及Kaplan-Meier法，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果发表论文期刊网
2.1 eIF4E在大肠癌组织、大肠腺瘤及癌旁正常组织中的表达
eIF4E在大肠癌组织及大肠腺瘤组织的表达较癌旁组织高(P＜0.05)；大肠癌组织与大肠腺瘤组织差异无统计学意义(P＞0.05)，详见表1，免疫组化表达见图1～3(见封2)。表1 eIF4E在三种组织中表达水平的比较（略）
2.2 eIF4E表达与大肠癌一般临床特征的关系
不同性别、年龄、腺瘤史及肿瘤家族史患者的eIF4E阳性表达差异未见统计学意义(P＞0.05)，详见表2。表2 eIF4E的表达与大肠癌患者一般临床特征的关系（略）
2.3 eIF4E表达与大肠癌病理特征的关系
不同肿瘤部位、大小及分化程度组织eIF4E阳性表达差异未见统计学意义(P＞0.05)，详见表3。表3 eIF4E表达与大肠癌病理特征的关系（略）
2.4 eIF4E表达与大肠癌临床分期的关系
eIF4E阳性表达与临床分期及淋巴结转移情况无关(P＞0.05)，而与肿瘤浸润深度有关(P＜0.05)，阳性表达率随浸润深度的增加而增高。表4 eIF4E表达与临床分期的关系（略）
2.5 eIF4E表达与大肠癌根治术后复发转移的关系
eIF4E在根治术后无复发转移的38例中阳性表达34例，有复发转移12例均为阳性表达，表达率分别为89.5％及100％，两组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
发表论文期刊网
2.6 eIF4E表达与大肠癌患者生存的关系
eIF4E表达阳性者生存曲线较阴性者降低，2年生存率eIF4E(-)者为100％，(＋)者为87.0％，(＋＋)者为69.6％。(-)、(＋)及(＋＋)三组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)，(详见图4，见封3)。
3 讨论
eIF4E是分子量为25kD的细胞质蛋白，基因定位于4号染色体。正常情况下，eIF4E的表达水平低，主要用于维持细胞正常生命活动。高水平 eIF4E选择性增加体内影响细胞生长、分化的蛋白质的合成，促进细胞的增殖反应，并对癌基因表达起重要作用，导致细胞恶性转化。也发现eIF4E在一些肿瘤中高表达，调控肿瘤恶性相关基因和因子的表达，参与肿瘤的侵袭和转移。
Rosenwald等［6］报道eIF4E在大肠癌组织中出现高表达，证实eIF4E表达水平增高是大肠癌发生的早期事件。Barkeld等［7］检测结肠癌、结肠息肉及正常组织中eIF4E的表达情况，发现结肠癌中eIF4E表达水平最高，而正常组织表达水平最低，说明其对结肠癌的发生起重要作用，他们通过多元分析进一步发现，eIF4E的表达与结肠癌患者性别、年龄、种族、息肉史及结肠癌家族史没有相关性。本研究结果显示eIF4E在大肠癌组织中的阳性表达率为91.7％，在癌旁组织中阳性表达为10％，在大肠腺瘤中阳性表达为90％。大肠癌及大肠腺瘤与癌旁正常组织相比差异有统计学意义 (P＜0.05)，大肠癌与大肠腺瘤间的阳性表达率差异无统计学意义，提示eIF4E参与了大肠黏膜的早期癌变，在大肠癌的发生中起了重要作用。本研究未发现eIF4E的表达与患者性别、年龄、病变部位、肿瘤大小有关，与上述Barkeld［7］的研究结果一致。
本研究结果显示eIF4E的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期无关，而与原发病灶浸润深度密切相关。这与一些作者将该指标用于其它肿瘤研究的结果不完全一致［1，5，8-9］，进一步说明肿瘤的浸润、转移机制复杂，尚难得出一致结论。本研究发现eIF4E表达与根治术后有无复发转移及生存率之间无关，提示eIF4E可否作为大肠癌的预后指标尚需进一步论证。
【参考文献】
［1］Rosenwald IB.The role of translation in neoplastic transformation from a pathologists point of view［J］.Oncogene，2004，23(18)：3230-3247.
［2］Norton KS，McClusky D，Sen S，et al.LK1B is elevate with eIF4E over expr-ession in breast cancer［J］.Surg Res，2004，116(1)：98.
［3］Seki N，Takasu T，Mandai K，et al.Expression of eukaryotic initiation Factor 4E in atypical adenomatous hyperplasia and adenocarcinoma of the Human peripheral lung［J］.Clin Cancer Res，2002，8(10)：3046-3053.
［4］Topisirovic I，Guzman MJ，McConnell JD，et al.Aberrant dukaryotic translation initiation factor 4E-dependent mRNA transport impedes hematopoietic differentiation and contributes to leukem-ogenesis［J］.Mol Cell Biol，2003(18)：8992-9002.
［5］刘子沛，朱瑾，周金莲，等.胆管癌组织中真核细胞翻译起始因子4E和基质金属蛋白酶-9 的表达及临床意义的研究［J］.消化外科，2005，4(2)：113-118.
发表论文期刊网
［6］Rosenwald IB，Chen JJ，Wang S，et al.Upregulation of protein synthesis initiation factor eIF4E is an early event during colon carcinogenesis［J］.Oncogene，1999，18(15)：2507-1257.
［7］Berkeld H，Elba A，Turbat H.Expression of the Translation Initiation Factor eIF4E in the Polyp-Cancer Sequence in the Colon1［J］.Cancer，2001，10：663-666.
［8］方向明，熊碧芳，彭波，等.真核细胞起始因子4E及c-myc在胃癌中的表达［J］.武汉大学学报，2005，26(5)：579-581.
［9］Chen CN，Hsieh FJ，Cheng YM，et al.Expression of Eukaryotic Initia-tion Factor 4E in Gastric Adenocarcinoma and Its Association With Cl-inical Outcome［J］.Sur Oncol，2004，86：22-27.
【关键词】 大肠癌；真核细胞起始因子4E；免疫组织化学
Expression of eIF4E in Human Colorectal Cancer
(The Affiliated Hospital of Ningxia Medical College，Yinchuan 750004)
Abstract：Objective To study the expression of Eukaryotic Initiation Factor 4E(eIF4E)in human colorectal cancer and its relationship to clinical pathologic feature.Methods The express of eIF4E in 60 cases with colorectal cancer were examined by immunohistochemical assay.The normal tissue of adjacent to cancer and large intestine adenomas(20 cases)were served as a contral group.Results The positive expression rates of eIF4E in the colorectal cancer tissues，the normal tissues of adjacent to cancer，and the large intestine adenoma tissues were 91.7%，10%，and 90% respectively.Compared colorectal cancer tissue with the normal tissue of adjacent to cancer，there was a significant difference(P＜0.05)；compared large intestine adenoma tissue with the normal tissue of adjacent to cancer，there was a significant difference(P＜0.05)；The positive expression was associated with invasiveness depth，but not related to patients' gender，age，profession，family history，location of cancer，tumor size，histological differentiation，lymph node metastasis and Dukes'stage.Conclusion eIF4E was over-expressed in colorectal cancer.
Key words：colorectal cancer；eIF4E；immunohistochemistry
近年来，真核细胞起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)与肿瘤的关系日益受到重视。eIF4E即mRNA帽结合蛋白，在蛋白质合成的起始阶段起重要调控作用，是蛋白质合成的限速因子，参与细胞生长调节，并具有抗凋亡活性［1-4］。有关eIF4E在大肠癌方面的研究尚少，本研究通过检测eIF4E在大肠癌组织中的表达情况，探讨其在大肠癌发生、发展中的作用。
1 资料与方法
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1.1 临床资料
宁夏医学院附属医院2001—2003年收住且随访资料完整60例大肠癌患者，均经病理组织学确诊。其中男36例，女24例，年龄26～74岁，中位年龄56岁。有肿瘤家族史7例，大肠腺瘤病史 10例。肿瘤部位：直肠21例，乙状结肠12例，升结肠17例，横结肠3例，降结肠7例。组织学类型按WHO国际肿瘤学分类标准，其中：低分化腺癌17 例，高中分化腺癌43例。浸润深度：浆膜内9例，浆膜外51例。肿瘤大小：最长径≤5cm者32例，＞5cm者28例。按我国大肠癌Dukes分期标准进行临床分期：A期6例，B期33例，C期11例，D期10例。术后发现有淋巴结转移16例，无淋巴结转移44例；远处转移9例。根治性切除50例，姑息性切除10例。根治术后出现复发转移12例。所有患者术前均未接受化疗、放疗或针对肿瘤的非手术治疗。病例均随访2年以上，随访率100%；尚存活46例，死亡14例。取癌旁正常组织和大肠息肉各20例作为对照。
1.2 方法
兔抗人eIF4E多克隆抗体购于CST公司，DAB及免疫组化Elivision plus广谱试剂盒均购于福州迈新生物技术开发有限公司。所有标本经10％福尔马林固定，石蜡包埋、连续切片4μm厚，脱蜡水化。经微波炉热修复和 3％H2O2处理后，加eIF4E抗体4℃过夜。PBS洗片后加入第二抗体室温下孵育30min。PBS洗片后加入DAB显色液，光学显微镜显色，苏木素复染，脱水，封片。用PBS液代替一抗作阴性对照，用已知的肺癌阳性片作阳性对照。
1.3 结果判断
eIF4E定位于细胞浆，以细胞浆中出现棕黄色颗粒，而背景清晰为阳性。高倍镜下取10个不同视野，每个视野计数100个细胞，取平均值。结合阳性细胞所占百分比和染色强度进行半定量分析［5］：染色强度按下列标准评定：阴性为0分，π淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；染色的阳性细胞所占百分比评定：阴性为0分，阳性细胞数≤25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％为3分，＞75％为4分。综合染色细胞百分比及染色强度分为三级：0～3分为阴性表达(-)；≥4分为阳性表达(＋)。
1.4 统计学方法
数据处理采用SPSS 13.0统计软件，χ2检验及Kaplan-Meier法，P＜0.05为差异有统计学意义。
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2.1 eIF4E在大肠癌组织、大肠腺瘤及癌旁正常组织中的表达
eIF4E在大肠癌组织及大肠腺瘤组织的表达较癌旁组织高(P＜0.05)；大肠癌组织与大肠腺瘤组织差异无统计学意义(P＞0.05)，详见表1，免疫组化表达见图1～3(见封2)。表1 eIF4E在三种组织中表达水平的比较（略）
2.2 eIF4E表达与大肠癌一般临床特征的关系
不同性别、年龄、腺瘤史及肿瘤家族史患者的eIF4E阳性表达差异未见统计学意义(P＞0.05)，详见表2。表2 eIF4E的表达与大肠癌患者一般临床特征的关系（略）
2.3 eIF4E表达与大肠癌病理特征的关系
不同肿瘤部位、大小及分化程度组织eIF4E阳性表达差异未见统计学意义(P＞0.05)，详见表3。表3 eIF4E表达与大肠癌病理特征的关系（略）
2.4 eIF4E表达与大肠癌临床分期的关系
eIF4E阳性表达与临床分期及淋巴结转移情况无关(P＞0.05)，而与肿瘤浸润深度有关(P＜0.05)，阳性表达率随浸润深度的增加而增高。表4 eIF4E表达与临床分期的关系（略）
2.5 eIF4E表达与大肠癌根治术后复发转移的关系
eIF4E在根治术后无复发转移的38例中阳性表达34例，有复发转移12例均为阳性表达，表达率分别为89.5％及100％，两组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
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2.6 eIF4E表达与大肠癌患者生存的关系
eIF4E表达阳性者生存曲线较阴性者降低，2年生存率eIF4E(-)者为100％，(＋)者为87.0％，(＋＋)者为69.6％。(-)、(＋)及(＋＋)三组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)，(详见图4，见封3)。
3 讨论
eIF4E是分子量为25kD的细胞质蛋白，基因定位于4号染色体。正常情况下，eIF4E的表达水平低，主要用于维持细胞正常生命活动。高水平 eIF4E选择性增加体内影响细胞生长、分化的蛋白质的合成，促进细胞的增殖反应，并对癌基因表达起重要作用，导致细胞恶性转化。也发现eIF4E在一些肿瘤中高表达，调控肿瘤恶性相关基因和因子的表达，参与肿瘤的侵袭和转移。
Rosenwald等［6］报道eIF4E在大肠癌组织中出现高表达，证实eIF4E表达水平增高是大肠癌发生的早期事件。Barkeld等［7］检测结肠癌、结肠息肉及正常组织中eIF4E的表达情况，发现结肠癌中eIF4E表达水平最高，而正常组织表达水平最低，说明其对结肠癌的发生起重要作用，他们通过多元分析进一步发现，eIF4E的表达与结肠癌患者性别、年龄、种族、息肉史及结肠癌家族史没有相关性。本研究结果显示eIF4E在大肠癌组织中的阳性表达率为91.7％，在癌旁组织中阳性表达为10％，在大肠腺瘤中阳性表达为90％。大肠癌及大肠腺瘤与癌旁正常组织相比差异有统计学意义 (P＜0.05)，大肠癌与大肠腺瘤间的阳性表达率差异无统计学意义，提示eIF4E参与了大肠黏膜的早期癌变，在大肠癌的发生中起了重要作用。本研究未发现eIF4E的表达与患者性别、年龄、病变部位、肿瘤大小有关，与上述Barkeld［7］的研究结果一致。
本研究结果显示eIF4E的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期无关，而与原发病灶浸润深度密切相关。这与一些作者将该指标用于其它肿瘤研究的结果不完全一致［1，5，8-9］，进一步说明肿瘤的浸润、转移机制复杂，尚难得出一致结论。本研究发现eIF4E表达与根治术后有无复发转移及生存率之间无关，提示eIF4E可否作为大肠癌的预后指标尚需进一步论证。
【参考文献】
［1］Rosenwald IB.The role of translation in neoplastic transformation from a pathologists point of view［J］.Oncogene，2004，23(18)：3230-3247.
［2］Norton KS，McClusky D，Sen S，et al.LK1B is elevate with eIF4E over expr-ession in breast cancer［J］.Surg Res，2004，116(1)：98.
［3］Seki N，Takasu T，Mandai K，et al.Expression of eukaryotic initiation Factor 4E in atypical adenomatous hyperplasia and adenocarcinoma of the Human peripheral lung［J］.Clin Cancer Res，2002，8(10)：3046-3053.
［4］Topisirovic I，Guzman MJ，McConnell JD，et al.Aberrant dukaryotic translation initiation factor 4E-dependent mRNA transport impedes hematopoietic differentiation and contributes to leukem-ogenesis［J］.Mol Cell Biol，2003(18)：8992-9002.
［5］刘子沛，朱瑾，周金莲，等.胆管癌组织中真核细胞翻译起始因子4E和基质金属蛋白酶-9 的表达及临床意义的研究［J］.消化外科，2005，4(2)：113-118.
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［6］Rosenwald IB，Chen JJ，Wang S，et al.Upregulation of protein synthesis initiation factor eIF4E is an early event during colon carcinogenesis［J］.Oncogene，1999，18(15)：2507-1257.
［7］Berkeld H，Elba A，Turbat H.Expression of the Translation Initiation Factor eIF4E in the Polyp-Cancer Sequence in the Colon1［J］.Cancer，2001，10：663-666.
［8］方向明，熊碧芳，彭波，等.真核细胞起始因子4E及c-myc在胃癌中的表达［J］.武汉大学学报，2005，26(5)：579-581.
［9］Chen CN，Hsieh FJ，Cheng YM，et al.Expression of Eukaryotic Initia-tion Factor 4E in Gastric Adenocarcinoma and Its Association With Cl-inical Outcome［J］.Sur Oncol，2004，86：22-27.
