肝炎肝硬化患者血清肿瘤坏死因子-α及纤维化指标测定的临床意义
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时间：2011年3月21日 14:20
【摘要】 目的 了解肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及纤维化指标(HA、PCIII IVC)在肝硬化肝功能损害中的临床意义。方法 采用放射免疫分析法测定了52例肝炎后肝硬化患者(观察组)和28例慢性肝炎(对照组)患者血清TNF-α和血清HA、PCIII IVC的变化。结果 观察组52例患者血清中TNF-α浓度明显增高，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；观察组HA、PCIII、IVC水平明显高于对照组 (P＜0.01)。TNF-α与Child-Pugh分级无关(P＞0.05)。结论 提示TNF-α、HA、PCIII IVC在肝硬化病程进展中起一定作用。
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【关键词】 肝炎；肝硬化；肿瘤坏死因子；透明质酸；III型前胶原；IV型胶原
Abstract：Objective To explore the effect of Serum TNF?α，HA，PCIII and IVC in cases with with Cirrhosis after hepatitis. Methods The serum concentration of TNF?α in 52 cirrhosis cases with a history of hepatitis and in 28 chronic viral hepatitis patients were determined with radioimmunological assay methods.Results Serum TNF?α，HA，PCIII and IVC in 52 cirrhosis cases were significantly higher than those in 28 chronic viral hepatitis patients. Conclusion TNF?α,HA,PCIII IVC play an important role in the pathogeness of liver fibrosis.
Key words：cirrhosis after hepatitis；TNF；HA；PCIII IVC
我国是病毒性肝炎的高发区，肝硬化发病率高，是我国常见疾病和主要死亡病因之一。肿瘤坏死因子(Tunmor Necrosis Factor，TNF)是20世纪80年代发现由巨噬细胞和单核细胞分泌的一种重要的细胞因子，是一类重要的促肝纤维化的细胞因子之一，具有免疫效应和炎症反应的双重作用，各种原因致慢性肝损伤时，可激活单核巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，本文用放射免疫法测定了52例肝炎后肝硬化患者血清 TNF-α和血清纤维化指标(HA、PCIII IVC)的变化，以了解TNF-α及HA、PCIII、IVC在肝硬化肝功能损害中的临床意义。
1 对象与方法
1.1 研究对象
我院2006年6—12月收治并确诊为病毒性肝炎、病毒性肝炎后肝硬化的住院病人共52例(观察组)，慢性肝炎患者28例作为本次研究的对照组。全部病例均排除肝占位性疾病、结缔组织病、血液系统病、慢性肾脏疾病、代谢性疾病、糖尿病等内分泌系统疾病以及其它炎性疾病。
1.2 仪器和试剂发表论文网
腹部B超(美国惠普公司Agilent IMAGEPOINT HX)，美国贝克曼全自动生化分析仪(CX-5)，快速血糖仪(美国强生)。γ-放射免疫自动分析仪(GC 1200安徽中佳光电公司生产)，可调微量加样器(芬兰，Finnpipette)，定时计(北京宣武区环境保护仪器厂生产)，SANYO MEDICA FREEZER-70℃反应管(浙江拱东医用塑料厂生产)。上海BECKMAN ALLEGRA TM21 R centrifuge(美国产，可调温度离心机)。γ-放射免疫计数器FJ-2003/50ARIACENTRIFUGE(国产，RIA数据处理器)。
1.3 肿瘤坏死因子放免药盒(TNF RIA Kit)购自北京市福瑞生物工程公司，批号20040701。HA、PCIII、IVC试剂由上海海军医学研究所提供，按说明书严格操作。
1.4 病例分组(共80例)
(1)观察组(52例)：1例酒精性肝硬化、病毒性肝炎后肝硬化病人51例，依据既往病史、体检、肝功能检查、腹部B超、各型肝炎病毒血清学指标、肝硬化五项指标及相关实验室检查，全部病人均符合2000年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准［1］。其中乙型肝炎病毒感染48例，丙型肝炎病毒感染 3例，腹水28例，有食管静脉曲张31例，消化道出血10例，肝昏迷4例。其中肝功能Child-Pugh score分极，分极标准包括血清总胆红素、血浆白蛋白、肝性脑病、腹水的程度、营养状况。A、B级35例、C级17例。性别分别为男36例，女16例，年龄11～72岁，平均(43±15)岁。无心、肺病史，心电图正常。(2)对照组：为慢性肝炎患者共28例。进行肝功能和超声波检查。男24例，女4 例。其中肝损伤轻度8例、中度10例、重度10例。年龄10～64岁，平均(38±9)岁。
1.5 血清标本的收集与检测
无菌抽取空腹静脉血2 mL，编号分装，注入不含抗凝剂普通试管中，离心后分离血清。置-30℃保存待测TNF-α。本实验采用平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按表操作。由自动 γ-计数器预先编制程序，直接给出有关参数。HA、PCIII、IVC按试剂盒中操作程序进行。
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1.6 统计学方法
数据以均数±标准差(±s)表示。二组间均数比较采用Student`s t检验，组间两两比较采用Student?Newman?Keuls。
2 结果
2．1 两组患者血清TNF-α、血清胆红素及肝功能的变化(表1)表1 两组患者血清TNF-α、血清胆红素及肝功能的变化(略)
观察组患者血清TNF-α和血清胆红素(SB)含量明显升高，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；谷丙转氨酶(ALT)两组变化差异无统计学意义。
2.2 对照组与观察组不同肝功能Child-pugh分级者血清TNF-α浓度变化(表2)表2 不同Child-pugh分级患者血清TNF-α的变化（略）
TNF-α含量观察组Child B、C明显高于对照组(P＜0.05或0.01)，而各级间差异无统计学意义(P＞0.05)。
2.3 两组患者血清肝硬化指标HA、PCIII、IVC的变化(表3)表3 血清TNF-α水平与患者血清纤维化标志物水平比较(略)
观察组HA、PCIII、IVC水平明显高于对照组(P＜0.01)。
3 讨论
慢性肝脏疾病是由多种不同病因引起的肝脏损伤。随着损伤后的修复，会伴随肝纤维化的产生，进一步则发展为肝硬化。随之而来的是肝硬化失代偿、肝功能不全甚至是肿瘤的发生，约25%病毒性肝炎最终发展为肝纤维化、肝硬化。TNF-α是一类重要的促肝纤维化细胞因子，具有免疫效应和炎症反应双重作用，主要由单核巨噬细胞(包括KC)产生，健康机体中含有生理水平的TNF-a，水平过高则损伤组织。陈乃玲等用原位杂交方法发现TNF-α在肝硬化病人的表达阳性率及表达程度与慢性肝病者相比明显增高［2］。郭继忠等［3］在四氯化碳制备的大鼠纤维化过程中，血清 TNF-α明显上升，在肝纤维化动物模型中，亦发现纤维化早期肝组织内出现TNF-α mRNA水平上升至纤维化期达峰值［4］。李德民等报道TNF-α在胆管结扎术和部分门静脉结扎术形成的2种门静脉高压大鼠模型中TNF-α血清浓度均升高［5］。本文肝硬化患者血清中TNF-α水平显著高于对照慢性肝炎组，与报道一致。本文观察的两组患者均有肝功谷丙转氨酶升高，但差异无统计学意义，表明两组患者肝组织损伤时，炎症程度无差异。TNF-α与肝损害密切相关，是由于各种原因致慢性肝损伤时，被激活的单核巨噬细胞分泌TNF-α及多种细胞因子，TNF-α与其他细胞因子共同作用并形成网络，对肝脏有明显的毒性，同时可引起肝细胞坏死。发表论文网
TNF-α与其他淋巴因子共同作用，参与慢性肝病的免疫过程。肝硬化时肝实质细胞数目减少，功能下降，内毒素清除作用降低，由于单核巨噬细胞系统对内毒素敏感性增加，即使无内毒素血症的发生，亦激活单核巨噬细胞系统释放TNF-α。体外研究也证实TNF-α能刺激星状细胞HSC增生进而促进胶原、蛋白聚糖合成［6］。正常肝脏，肝星状细胞处于静止期，静止期肝星状细胞可产生少量的Ⅲ、Ⅳ型胶原和细胞因子。肝损伤时由于细胞-基质间相互作用，激活肝星状细胞(HSC)过多的合成并分泌多种间质胶原，纤维化时，可增加3～4倍［7］。肝硬化患者肝功能失代偿，细胞因子廓清作用减弱，最终导致TNF-α水平明显升高［8］。血清肝纤维化五项指标被用于临床诊断肝纤维化已经数年，各个标志物检测的准确性、特异性不尽一致，血清透明质酸的诊断敏感度最好［9］。在肝纤维化过程中，肝实质细胞和间质细胞合成增加，引起肝内和血液中透明质酸含量升高，加之肝纤维化时，门体侧枝循环形成，部分透明质酸不流经肝脏导致其血清中浓度增高。肝纤维化时，肝损害累计内皮细胞功能，肝窦内皮细胞清除减少。本文结果显示观察组52例患者血清中HA、PCIII、IVC与对照组患者比较明显增高。故HA、PCIII、IVC可反映胶原的生成及纤维化程度。临床通过检测上述指标，可间接了解肝纤维化情况。
【参考文献】
［1］中华医学会传染病与寄生虫病学会.肝病学分会、病毒性肝炎防治方案［J］.中华肝脏病杂志，2000，8：324-329.
［2］李德民，王天才，赵秋.TNF-α和IL-6在两种门静脉高压大鼠模型中的变化［J］.华中科技大学学报，2002，31(5)：525-526.
［3］郭继忠，占强，唐建英，等.肝硬化患者血浆浆钙素基因相关肽及肿瘤坏死因子-α水平的变化［J］.中华消化杂志，2000，20(3)：203-204.
［4］Berman B，Wietzerbin J，Sanceau J.Pentoxifylline Inhibits cer-tain constitutive and Tumor necrosis factor-a-induced activities of human normal dermal fibroblasts［J］.J Invest Dermatol，1992，5(5)：705.
［5］陈乃玲，邓涛，白玲.慢性肝病肝组织凋亡蛋白TNF-α、TNF、BcL-2家族表达的研究［J］.临床肝胆杂志，2002，18(6)：112-113.
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［6］陈岳祥，黄裕新，王庆莉，等.抗TNF-a单抗对免疫性大鼠的纤维化影响［M］.中华消化杂志，1997，17(6)：358.
［7］周永新.现代肝硬化诊断治疗学［M］.北京：人民军医出版社，2002：2487-2489.
［8］David R，Nelson，Herbert L，et al.Activation of Tumor Necrosis Factor-a system in chronic Hepatitic C virus infection［J］.Digestive Diseases and Sciences，1997，42：375.
［9］李东，王法印.血清基质金属蛋白酶类检测的临床应用［J］.国外医学生物化学与检验学分册，2002，23(2)：100-110.
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【关键词】 肝炎；肝硬化；肿瘤坏死因子；透明质酸；III型前胶原；IV型胶原
Abstract：Objective To explore the effect of Serum TNF?α，HA，PCIII and IVC in cases with with Cirrhosis after hepatitis. Methods The serum concentration of TNF?α in 52 cirrhosis cases with a history of hepatitis and in 28 chronic viral hepatitis patients were determined with radioimmunological assay methods.Results Serum TNF?α，HA，PCIII and IVC in 52 cirrhosis cases were significantly higher than those in 28 chronic viral hepatitis patients. Conclusion TNF?α,HA,PCIII IVC play an important role in the pathogeness of liver fibrosis.
Key words：cirrhosis after hepatitis；TNF；HA；PCIII IVC
我国是病毒性肝炎的高发区，肝硬化发病率高，是我国常见疾病和主要死亡病因之一。肿瘤坏死因子(Tunmor Necrosis Factor，TNF)是20世纪80年代发现由巨噬细胞和单核细胞分泌的一种重要的细胞因子，是一类重要的促肝纤维化的细胞因子之一，具有免疫效应和炎症反应的双重作用，各种原因致慢性肝损伤时，可激活单核巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，本文用放射免疫法测定了52例肝炎后肝硬化患者血清 TNF-α和血清纤维化指标(HA、PCIII IVC)的变化，以了解TNF-α及HA、PCIII、IVC在肝硬化肝功能损害中的临床意义。
1 对象与方法
1.1 研究对象
我院2006年6—12月收治并确诊为病毒性肝炎、病毒性肝炎后肝硬化的住院病人共52例(观察组)，慢性肝炎患者28例作为本次研究的对照组。全部病例均排除肝占位性疾病、结缔组织病、血液系统病、慢性肾脏疾病、代谢性疾病、糖尿病等内分泌系统疾病以及其它炎性疾病。
1.2 仪器和试剂发表论文网
腹部B超(美国惠普公司Agilent IMAGEPOINT HX)，美国贝克曼全自动生化分析仪(CX-5)，快速血糖仪(美国强生)。γ-放射免疫自动分析仪(GC 1200安徽中佳光电公司生产)，可调微量加样器(芬兰，Finnpipette)，定时计(北京宣武区环境保护仪器厂生产)，SANYO MEDICA FREEZER-70℃反应管(浙江拱东医用塑料厂生产)。上海BECKMAN ALLEGRA TM21 R centrifuge(美国产，可调温度离心机)。γ-放射免疫计数器FJ-2003/50ARIACENTRIFUGE(国产，RIA数据处理器)。
1.3 肿瘤坏死因子放免药盒(TNF RIA Kit)购自北京市福瑞生物工程公司，批号20040701。HA、PCIII、IVC试剂由上海海军医学研究所提供，按说明书严格操作。
1.4 病例分组(共80例)
(1)观察组(52例)：1例酒精性肝硬化、病毒性肝炎后肝硬化病人51例，依据既往病史、体检、肝功能检查、腹部B超、各型肝炎病毒血清学指标、肝硬化五项指标及相关实验室检查，全部病人均符合2000年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准［1］。其中乙型肝炎病毒感染48例，丙型肝炎病毒感染 3例，腹水28例，有食管静脉曲张31例，消化道出血10例，肝昏迷4例。其中肝功能Child-Pugh score分极，分极标准包括血清总胆红素、血浆白蛋白、肝性脑病、腹水的程度、营养状况。A、B级35例、C级17例。性别分别为男36例，女16例，年龄11～72岁，平均(43±15)岁。无心、肺病史，心电图正常。(2)对照组：为慢性肝炎患者共28例。进行肝功能和超声波检查。男24例，女4 例。其中肝损伤轻度8例、中度10例、重度10例。年龄10～64岁，平均(38±9)岁。
1.5 血清标本的收集与检测
无菌抽取空腹静脉血2 mL，编号分装，注入不含抗凝剂普通试管中，离心后分离血清。置-30℃保存待测TNF-α。本实验采用平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按表操作。由自动 γ-计数器预先编制程序，直接给出有关参数。HA、PCIII、IVC按试剂盒中操作程序进行。
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1.6 统计学方法
数据以均数±标准差(±s)表示。二组间均数比较采用Student`s t检验，组间两两比较采用Student?Newman?Keuls。
2 结果
2．1 两组患者血清TNF-α、血清胆红素及肝功能的变化(表1)表1 两组患者血清TNF-α、血清胆红素及肝功能的变化(略)
观察组患者血清TNF-α和血清胆红素(SB)含量明显升高，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；谷丙转氨酶(ALT)两组变化差异无统计学意义。
2.2 对照组与观察组不同肝功能Child-pugh分级者血清TNF-α浓度变化(表2)表2 不同Child-pugh分级患者血清TNF-α的变化（略）
TNF-α含量观察组Child B、C明显高于对照组(P＜0.05或0.01)，而各级间差异无统计学意义(P＞0.05)。
2.3 两组患者血清肝硬化指标HA、PCIII、IVC的变化(表3)表3 血清TNF-α水平与患者血清纤维化标志物水平比较(略)
观察组HA、PCIII、IVC水平明显高于对照组(P＜0.01)。
3 讨论
慢性肝脏疾病是由多种不同病因引起的肝脏损伤。随着损伤后的修复，会伴随肝纤维化的产生，进一步则发展为肝硬化。随之而来的是肝硬化失代偿、肝功能不全甚至是肿瘤的发生，约25%病毒性肝炎最终发展为肝纤维化、肝硬化。TNF-α是一类重要的促肝纤维化细胞因子，具有免疫效应和炎症反应双重作用，主要由单核巨噬细胞(包括KC)产生，健康机体中含有生理水平的TNF-a，水平过高则损伤组织。陈乃玲等用原位杂交方法发现TNF-α在肝硬化病人的表达阳性率及表达程度与慢性肝病者相比明显增高［2］。郭继忠等［3］在四氯化碳制备的大鼠纤维化过程中，血清 TNF-α明显上升，在肝纤维化动物模型中，亦发现纤维化早期肝组织内出现TNF-α mRNA水平上升至纤维化期达峰值［4］。李德民等报道TNF-α在胆管结扎术和部分门静脉结扎术形成的2种门静脉高压大鼠模型中TNF-α血清浓度均升高［5］。本文肝硬化患者血清中TNF-α水平显著高于对照慢性肝炎组，与报道一致。本文观察的两组患者均有肝功谷丙转氨酶升高，但差异无统计学意义，表明两组患者肝组织损伤时，炎症程度无差异。TNF-α与肝损害密切相关，是由于各种原因致慢性肝损伤时，被激活的单核巨噬细胞分泌TNF-α及多种细胞因子，TNF-α与其他细胞因子共同作用并形成网络，对肝脏有明显的毒性，同时可引起肝细胞坏死。发表论文网
TNF-α与其他淋巴因子共同作用，参与慢性肝病的免疫过程。肝硬化时肝实质细胞数目减少，功能下降，内毒素清除作用降低，由于单核巨噬细胞系统对内毒素敏感性增加，即使无内毒素血症的发生，亦激活单核巨噬细胞系统释放TNF-α。体外研究也证实TNF-α能刺激星状细胞HSC增生进而促进胶原、蛋白聚糖合成［6］。正常肝脏，肝星状细胞处于静止期，静止期肝星状细胞可产生少量的Ⅲ、Ⅳ型胶原和细胞因子。肝损伤时由于细胞-基质间相互作用，激活肝星状细胞(HSC)过多的合成并分泌多种间质胶原，纤维化时，可增加3～4倍［7］。肝硬化患者肝功能失代偿，细胞因子廓清作用减弱，最终导致TNF-α水平明显升高［8］。血清肝纤维化五项指标被用于临床诊断肝纤维化已经数年，各个标志物检测的准确性、特异性不尽一致，血清透明质酸的诊断敏感度最好［9］。在肝纤维化过程中，肝实质细胞和间质细胞合成增加，引起肝内和血液中透明质酸含量升高，加之肝纤维化时，门体侧枝循环形成，部分透明质酸不流经肝脏导致其血清中浓度增高。肝纤维化时，肝损害累计内皮细胞功能，肝窦内皮细胞清除减少。本文结果显示观察组52例患者血清中HA、PCIII、IVC与对照组患者比较明显增高。故HA、PCIII、IVC可反映胶原的生成及纤维化程度。临床通过检测上述指标，可间接了解肝纤维化情况。
【参考文献】
［1］中华医学会传染病与寄生虫病学会.肝病学分会、病毒性肝炎防治方案［J］.中华肝脏病杂志，2000，8：324-329.
［2］李德民，王天才，赵秋.TNF-α和IL-6在两种门静脉高压大鼠模型中的变化［J］.华中科技大学学报，2002，31(5)：525-526.
［3］郭继忠，占强，唐建英，等.肝硬化患者血浆浆钙素基因相关肽及肿瘤坏死因子-α水平的变化［J］.中华消化杂志，2000，20(3)：203-204.
［4］Berman B，Wietzerbin J，Sanceau J.Pentoxifylline Inhibits cer-tain constitutive and Tumor necrosis factor-a-induced activities of human normal dermal fibroblasts［J］.J Invest Dermatol，1992，5(5)：705.
［5］陈乃玲，邓涛，白玲.慢性肝病肝组织凋亡蛋白TNF-α、TNF、BcL-2家族表达的研究［J］.临床肝胆杂志，2002，18(6)：112-113.
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［6］陈岳祥，黄裕新，王庆莉，等.抗TNF-a单抗对免疫性大鼠的纤维化影响［M］.中华消化杂志，1997，17(6)：358.
［7］周永新.现代肝硬化诊断治疗学［M］.北京：人民军医出版社，2002：2487-2489.
［8］David R，Nelson，Herbert L，et al.Activation of Tumor Necrosis Factor-a system in chronic Hepatitic C virus infection［J］.Digestive Diseases and Sciences，1997，42：375.
［9］李东，王法印.血清基质金属蛋白酶类检测的临床应用［J］.国外医学生物化学与检验学分册，2002，23(2)：100-110.
