梗阻性黄疸家兔血浆中蛋白质的电泳变化
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发布者：张坤 秦文斌 韩丽莎 胡海 裴娟慧 张圆
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时间：2011年1月17日 10:44
【摘要】 目的：研究梗阻性黄疸家兔血浆中蛋白质电泳变化。方法：复制家兔梗阻性黄疸模型，用淀粉-琼脂糖混合凝胶薄层电泳检测血浆中蛋白质电泳的变化。结果：血浆蛋白中α1球蛋白组分增多、纤维蛋白原增多;在血红蛋白类物质的三个区带中，有一个区带增多。结论：梗阻性黄疸家兔血浆中蛋白质成分发生明显变化，此变化是否与手术因素、黄疸因素或是机体对手术刺激的应激反应等有关，有待于深入研究。
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【关键词】 梗阻性黄疸;家兔;血浆蛋白;血红蛋白
Abstract Objective： To study the changes in plasma protein electrophoresis of rabbits with obstructive jaundice. Methods：Electrophoresis of agarose-starch mixed gel was used in these experiments. Results： There was an increases in α1 globulin and fibrinogen. Among the three electrophoresis zones of hemoglobin, there was an increase in one of them. Conclusions： There are some obvious changes in plasma protein elements of the rabbits with obstructive jaundice. It needs a further study to reveal if this is related to such factors as jaundice, operation or stress.
Key words Obstructive jaundice; Rabbit ; Plasma protein; Hemoglobin
我们在关于血浆中蛋白质电泳变化与人类常见疾病关系的系列研究中发现，个别胆石症等梗阻性黄疸患者血浆中蛋白质电泳行为有变化，第一次电泳后原点残留血红蛋白量增多[1]，而目前国内外有关梗阻性黄疸研究中，很少涉及血浆中蛋白质的变化[2-5]。为了进一步深入研究，本实验通过复制家兔梗阻性黄疸动物模型及蛋白质电泳方法,探讨梗阻性黄疸后血浆中蛋白质的变化及其意义。
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1 材料与方法
1.1 取材 采用胆总管结扎法复制家兔梗阻性黄疸模型，耳缘静脉采血。
1.2 电泳及染色 采用淀粉-琼脂糖混合凝胶薄层电泳。电泳完毕后将玻璃板置于丽春红溶液染色过夜，次日取出晾干，再用联苯胺溶液染色10 min，用漂洗液10 min，室温晾干。
2 结果
2.1 家兔一般情况 家兔胆总管结扎术后12 h出现尿色加深，术后2 d出现皮肤及巩膜黄染,粪便颜色变浅。随梗阻时间延长,家兔食欲减退,精神不振,反应渐迟钝,皮肤及巩膜黄染加重。术后5 d时取血,血清总胆红素、谷丙转氨酶含量均明显升高。
2.2 家兔梗阻性黄疸后血浆中蛋白质的单向电泳 从图1中泳道2可见，家兔梗阻性黄疸后α1球蛋白组分总体减少、其中慢泳成分增多，α2球蛋白组分增多，β球蛋白组分也增多;血红蛋白类物质区带由三个变成两个，其中快泳成分明显多于慢泳者。从泳道4可见，家兔梗阻性黄疸后α1球蛋白组分减少不明显、但其中慢泳成分明显或增多，α2球蛋白组分减少，β球蛋白组分未增多，白蛋白减少;血红蛋白类物质三个区带的中央成分明显增多。
2.3 家兔梗阻性黄疸后血浆中蛋白质的双向电泳 家兔梗阻性黄疸后血浆中血浆蛋白的变化及血红蛋白类物质的变化，与单向电泳结果基本相同，见图2。图1 家兔梗阻性黄疸前、后血浆中蛋白质的单向电泳
3 讨论发表论文网站
梗阻性黄疸是由肝内小胆管、肝总管或胆总管的机械性梗阻所致胆红素沉着导致的皮肤与黏膜黄染，是临床多发病之一，患者常出现肝、肾功能损害及消化道出血等一系列并发症，严重危害机体健康甚至生命。目前，人们对梗阻性黄疸的研究多集中在分子生物学、血液流变学、影像学等几方面，其中很少涉及有关血浆中蛋白质的变化。本实验发现，家兔梗阻性黄疸后血浆中蛋白质的电泳发生如下改变：(1)血浆蛋白中α1球蛋白组分增多，纤维蛋白原增多，白蛋白减少。(2)血红蛋白类物质含量增多。
人类α1球蛋白组分有α1抗胰蛋白酶、α1酸性糖蛋白等，在营养不良、严重肝脏疾病、应激等情况下均可增多。在肝脏疾病及应激状态下，白蛋白合成可减少。人类血浆中与血红蛋白有关的成分有结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)、血红素结合蛋白(hemopexin,Hpx)。Hp位于α球蛋白区，Hpx位于β球蛋白区。Hp是一种α2糖蛋白，主要由肝脏合成，其功能是和血液中游离的血红蛋白结合，防止体内铁的丢失，属于一种急性反应蛋白。一些人类Hp的研究表明，许多疾病可以引起体内Hp含量的变化，而且某些疾病Hp含量的变化与疾病的严重程度相一致[7]。Hp广泛存在与哺乳动物体内，但每种动物Hp类型差异很大，且存在遗传多态性[8]。Hpx和游离血红素有特异结合能力，可配合结合珠蛋白对血红蛋白进行处理。Hpx可与血红素可逆地结合，避免血红蛋白和血红素从肾排出体外，是机体有效地保存铁的一种方式。已报道人类多种溶血性疾病、急慢性肝炎、肝癌、肾病综合征病人Hpx含量降低，某些肿瘤、慢性神经-肌肉病变病人Hpx含量升高[9]。有关家兔Hp或Hpx的含量及在梗阻性黄疸中发生变化的意义，尚未见文献报道。本研究推测，梗阻性黄疸家兔血红蛋白类物质成分增多，可能与上述两种蛋白有关。
家兔梗阻性黄疸前后血浆蛋白、血红蛋白成分发生明显变化。这些变化可能由黄疸因素、手术因素或是机体对手术刺激的应激反应等引起，有待进一步研究确定。
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【参考文献】
[1] 秦文斌,高丽君,苏燕,等.血红蛋白释放试验与轻型β地中海贫血[J].包头医学院学报,2007,23(6):561-563.
[2] 关晓东,张百萌,熊国珍,等.热应激预处理对梗阻性黄疸大鼠肾功能的影响[J].中国误诊学杂志,2008,8(13):3032-3034.
[3] 王天然,曾祥元,胡晓莉,等.可逆型梗阻性黄疸兔血液流变性研究[J].四川医学,2006,27,(9):886-888.
[4] 林琳,巩鹏,马晓兰,等.梗阻性黄疸大鼠肾细胞凋亡及bcl-2表达的作用[J].中国普外基础与临床杂志,2007,14(3):296-299.
[5] 王天然,周纬,黄海,等.可逆型梗阻性黄疸动物模型探讨[J].世界华人消化杂志,2005,13(12):1454-1456.
[6] 周斌,姚南,李玉民,等.内皮素在梗阻性黄疸肝、肾、心组织损伤中的作用及血塞通干预[J].中国普外基础与临床杂志,2006,13(1):77-81.
[7] Huntoon KM,Wang Y,Eppolito CA,et al.The acute phase protein haptoglobin regulates host immunity[J].J Leukoc Biol,2008,7(84):1-12.
[8] Wicher KB,Fries E.Haptoglobin,A hemoglobin-binding plasma protein,is present in bony fish and mammals but not in frog and chicken[J].Proc Natl Acad Sci USA,2006,103(11):4168-4173.
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[9] Huang HL,Stasyk T,Morandell S.Biomarker discovery in breast cancer serum using 2-D differential gel electrophoresis/MALDI-TOF/TOF and data validation by routine clinical assays[J].Electrophoresis,2006,27(8):1641-1650.
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【关键词】 梗阻性黄疸;家兔;血浆蛋白;血红蛋白
Abstract Objective： To study the changes in plasma protein electrophoresis of rabbits with obstructive jaundice. Methods：Electrophoresis of agarose-starch mixed gel was used in these experiments. Results： There was an increases in α1 globulin and fibrinogen. Among the three electrophoresis zones of hemoglobin, there was an increase in one of them. Conclusions： There are some obvious changes in plasma protein elements of the rabbits with obstructive jaundice. It needs a further study to reveal if this is related to such factors as jaundice, operation or stress.
Key words Obstructive jaundice; Rabbit ; Plasma protein; Hemoglobin
我们在关于血浆中蛋白质电泳变化与人类常见疾病关系的系列研究中发现，个别胆石症等梗阻性黄疸患者血浆中蛋白质电泳行为有变化，第一次电泳后原点残留血红蛋白量增多[1]，而目前国内外有关梗阻性黄疸研究中，很少涉及血浆中蛋白质的变化[2-5]。为了进一步深入研究，本实验通过复制家兔梗阻性黄疸动物模型及蛋白质电泳方法,探讨梗阻性黄疸后血浆中蛋白质的变化及其意义。
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1 材料与方法
1.1 取材 采用胆总管结扎法复制家兔梗阻性黄疸模型，耳缘静脉采血。
1.2 电泳及染色 采用淀粉-琼脂糖混合凝胶薄层电泳。电泳完毕后将玻璃板置于丽春红溶液染色过夜，次日取出晾干，再用联苯胺溶液染色10 min，用漂洗液10 min，室温晾干。
2 结果
2.1 家兔一般情况 家兔胆总管结扎术后12 h出现尿色加深，术后2 d出现皮肤及巩膜黄染,粪便颜色变浅。随梗阻时间延长,家兔食欲减退,精神不振,反应渐迟钝,皮肤及巩膜黄染加重。术后5 d时取血,血清总胆红素、谷丙转氨酶含量均明显升高。
2.2 家兔梗阻性黄疸后血浆中蛋白质的单向电泳 从图1中泳道2可见，家兔梗阻性黄疸后α1球蛋白组分总体减少、其中慢泳成分增多，α2球蛋白组分增多，β球蛋白组分也增多;血红蛋白类物质区带由三个变成两个，其中快泳成分明显多于慢泳者。从泳道4可见，家兔梗阻性黄疸后α1球蛋白组分减少不明显、但其中慢泳成分明显或增多，α2球蛋白组分减少，β球蛋白组分未增多，白蛋白减少;血红蛋白类物质三个区带的中央成分明显增多。
2.3 家兔梗阻性黄疸后血浆中蛋白质的双向电泳 家兔梗阻性黄疸后血浆中血浆蛋白的变化及血红蛋白类物质的变化，与单向电泳结果基本相同，见图2。图1 家兔梗阻性黄疸前、后血浆中蛋白质的单向电泳
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梗阻性黄疸是由肝内小胆管、肝总管或胆总管的机械性梗阻所致胆红素沉着导致的皮肤与黏膜黄染，是临床多发病之一，患者常出现肝、肾功能损害及消化道出血等一系列并发症，严重危害机体健康甚至生命。目前，人们对梗阻性黄疸的研究多集中在分子生物学、血液流变学、影像学等几方面，其中很少涉及有关血浆中蛋白质的变化。本实验发现，家兔梗阻性黄疸后血浆中蛋白质的电泳发生如下改变：(1)血浆蛋白中α1球蛋白组分增多，纤维蛋白原增多，白蛋白减少。(2)血红蛋白类物质含量增多。
人类α1球蛋白组分有α1抗胰蛋白酶、α1酸性糖蛋白等，在营养不良、严重肝脏疾病、应激等情况下均可增多。在肝脏疾病及应激状态下，白蛋白合成可减少。人类血浆中与血红蛋白有关的成分有结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)、血红素结合蛋白(hemopexin,Hpx)。Hp位于α球蛋白区，Hpx位于β球蛋白区。Hp是一种α2糖蛋白，主要由肝脏合成，其功能是和血液中游离的血红蛋白结合，防止体内铁的丢失，属于一种急性反应蛋白。一些人类Hp的研究表明，许多疾病可以引起体内Hp含量的变化，而且某些疾病Hp含量的变化与疾病的严重程度相一致[7]。Hp广泛存在与哺乳动物体内，但每种动物Hp类型差异很大，且存在遗传多态性[8]。Hpx和游离血红素有特异结合能力，可配合结合珠蛋白对血红蛋白进行处理。Hpx可与血红素可逆地结合，避免血红蛋白和血红素从肾排出体外，是机体有效地保存铁的一种方式。已报道人类多种溶血性疾病、急慢性肝炎、肝癌、肾病综合征病人Hpx含量降低，某些肿瘤、慢性神经-肌肉病变病人Hpx含量升高[9]。有关家兔Hp或Hpx的含量及在梗阻性黄疸中发生变化的意义，尚未见文献报道。本研究推测，梗阻性黄疸家兔血红蛋白类物质成分增多，可能与上述两种蛋白有关。
家兔梗阻性黄疸前后血浆蛋白、血红蛋白成分发生明显变化。这些变化可能由黄疸因素、手术因素或是机体对手术刺激的应激反应等引起，有待进一步研究确定。
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【参考文献】
[1] 秦文斌,高丽君,苏燕,等.血红蛋白释放试验与轻型β地中海贫血[J].包头医学院学报,2007,23(6):561-563.
[2] 关晓东,张百萌,熊国珍,等.热应激预处理对梗阻性黄疸大鼠肾功能的影响[J].中国误诊学杂志,2008,8(13):3032-3034.
[3] 王天然,曾祥元,胡晓莉,等.可逆型梗阻性黄疸兔血液流变性研究[J].四川医学,2006,27,(9):886-888.
[4] 林琳,巩鹏,马晓兰,等.梗阻性黄疸大鼠肾细胞凋亡及bcl-2表达的作用[J].中国普外基础与临床杂志,2007,14(3):296-299.
[5] 王天然,周纬,黄海,等.可逆型梗阻性黄疸动物模型探讨[J].世界华人消化杂志,2005,13(12):1454-1456.
[6] 周斌,姚南,李玉民,等.内皮素在梗阻性黄疸肝、肾、心组织损伤中的作用及血塞通干预[J].中国普外基础与临床杂志,2006,13(1):77-81.
[7] Huntoon KM,Wang Y,Eppolito CA,et al.The acute phase protein haptoglobin regulates host immunity[J].J Leukoc Biol,2008,7(84):1-12.
[8] Wicher KB,Fries E.Haptoglobin,A hemoglobin-binding plasma protein,is present in bony fish and mammals but not in frog and chicken[J].Proc Natl Acad Sci USA,2006,103(11):4168-4173.
发表论文网站
[9] Huang HL,Stasyk T,Morandell S.Biomarker discovery in breast cancer serum using 2-D differential gel electrophoresis/MALDI-TOF/TOF and data validation by routine clinical assays[J].Electrophoresis,2006,27(8):1641-1650.
