补肾中药复方灌肠和灌胃对大鼠卵泡发育的影响

【摘要】  目的探讨补肾中药复方资冲颗粒灌肠和灌胃对大鼠卵泡发育的影响。方法对幼龄大鼠(160～170g)采用灌肠和灌胃两种方法给予资冲颗粒，并与己烯雌酚、女金丹进行对照。对幼龄大鼠卵巢各级卵泡及黄体进行计数;对子宫、卵巢指数进行计算;对子宫组织形态学进行观察。结果资冲颗粒灌肠组、资冲颗粒灌胃组、己烯雌酚组、女金丹组作用相似，均可增加幼龄大鼠卵巢窦前卵泡数和卵泡总数(P<0.01)。资冲颗粒灌肠和灌胃均可增加幼龄大鼠子宫指数(P<0.05或P<0.01)，子宫内膜厚度(P<0.05)。结论资冲颗粒直肠给药和灌胃给药均具有促进幼龄大鼠卵泡发育的作用和增加雌激素样效应。提示直肠给药可能是促卵泡发育的有效途经之一。

【关键词】  补肾中药; 资冲颗粒; 直肠给药; 大鼠; 卵泡; 子宫指数

自制补肾中药复方资冲颗粒由熟地、菟丝子、川芎等5味药物组成,功效补肾活血、资冲调经。临床用于下丘脑-垂体-卵巢(H-P-O)轴功能失调性卵泡发育及排卵障碍所致月经后期、月经过少、闭经、崩漏、不孕等病症。本研究探讨资冲颗粒灌肠和灌胃对大鼠卵泡发育的影响。

　　1 材料

　　1.1 动物清洁级SD大鼠，雌性，体质量160～170 g，36只，体质量250～300 g，6只,购自成都中医药大学动物实验中心。合格证号：川实动管质第7号。

　　1.2 药物资冲颗粒剂浸膏(经验方),含生药1.5 g /ml,由成都中医药大学制剂教研室提供,批号:20020509;己烯雌酚, 0.5 mg/片,江西南昌制药厂,批号: 0010919,用蒸馏水配制成16.7 mg/L;女金丹(丸), 5 g/袋,昆明生达制药有限公司出品,批号:20011101,用蒸馏水配制成166.7 g/L。

　　2 方法

　　2.1 分组给药及处死方法将30只160～170 g大鼠随机分为5组，每组6只。另选6只250～300 g大鼠作正常对照组。正常对照组：经大鼠肛门插入导管3～4 cm，缓慢注入蒸馏水10 ml/kg，1次/d，连续15 d。空白模型组:蒸馏水灌肠10 ml/kg;己烯雌酚灌肠组:己烯雌酚混悬液灌肠0.17 mg/kg;女金丹灌肠组:女金丹混悬液灌肠1.67 g/kg;资冲颗粒灌肠组:资冲颗粒剂浸膏灌肠10 g/kg。以上各组灌肠方法、次数和天数均与正常对照组相同。资冲颗粒灌胃组:灌服资冲颗粒剂浸膏10 g/kg,1次/d,连续15 d。

　　同批给药15 d以上，阴道脱落细胞涂片后即日读片示动情(前)期则于当日处死。

　　2.2 检测指标及方法

　　2.2.1 子宫、卵巢指数处死大鼠后,立即取出子宫、卵巢,以电子分析天平称湿重,并换算成脏器指数。子宫指数=子宫重量(g)/体质量(kg)×100%;卵巢指数=卵巢重量(g)/体质量(kg)×100%。

　　2.2.2 观察大鼠卵巢组织形态学肉眼观察卵泡数较多侧卵巢在A.A.F固定液中固定 48 h后取出，经常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片(厚4 μm)，作常规HE染色。以日本CK40-F200OLYMPUS倒置显微镜计数各级卵泡及黄体数目。

　　2.2.3 观察大鼠子宫组织形态学子宫处理同“2.2.2”项。以SSC-DC398PSONY光学显微镜观察染色结果,以BI2000图像分析系统分析处理。

　　2.3 统计方法所有数据均采用SPSS10.0统计软件包处理。

　3 结果

　　3.1 资冲颗粒对大鼠子宫、卵巢指数的影响结果见表1。表1 资冲颗粒对大鼠子宫、卵巢指数的影响与正常对照组比较，★P<0.05，★★P<0.01;与空白模型组比较，*P<0.05，**P<0.01;n=6

　　3.2 资冲颗粒对大鼠卵巢各级卵泡及黄体的影响结果见表2。表2 资冲颗粒对大鼠卵巢各级卵泡及黄体的影响与正常对照组比较，★P<0.05，★★P<0.01;与空白模型组比较，*P<0.05，**P<0.01;n=6

　　3.3 资冲颗粒对大鼠子宫组织形态学的影响结果见表3。表3 资冲颗粒对大鼠子宫内膜厚度和肌层厚度的影响与正常对照组比较，★P<0.05，★★P<0.01;与空白模型组比较，*P<0.05，**P<0.01;n=6

　　4 讨论

　　根据形态、大小、生长速度和组织学特征，卵泡的生长发育可分为4个阶段，依次为原始卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡和成熟卵泡[1]。原始卵泡是卵母细胞储备的唯一形式，且其在胎儿期已成定局，出生后不再增多[2]。故在观察卵巢组织形态时，不计数原始卵泡数目。实验结果显示，资冲颗粒灌肠组、资冲颗粒灌胃组、女金丹灌肠组均可增加幼龄大鼠窦前卵泡和卵泡总数(P<0.05)。表明，中药各组均能促进幼龄大鼠卵泡的生长发育，以资冲颗粒灌肠及灌胃组作用显著。资冲颗粒灌肠及灌胃组较女金丹组窦前卵泡和卵泡总数均增多(P<0.05或P<0.01)。资冲颗粒不同给药途径比较(P>0.05)。中药各组促卵泡发育的表现与己烯雌酚组类似，为促进幼龄大鼠原始卵泡向窦前卵泡的发育。

　　从原始卵泡发育到成熟卵泡，雌激素均起一定的作用[1]。可见，卵泡发育与雌激素相关。本实验发现，己烯雌酚可明显增加幼龄大鼠窦前卵泡的数量(P<0.01)，证实其具有促进卵泡发育的作用。资冲颗粒灌肠组、资冲颗粒灌胃组较空白组窦前卵泡明显增多(P<0.01)，子宫指数和子宫内膜厚度较空白组明显增加(P<0.05)。可见，资冲颗粒可增加幼龄大鼠的雌激素样效应。资冲颗粒促进幼龄大鼠卵泡发育的作用与己烯雌酚相似。另外，我们以往的研究表明资冲颗粒直肠给药和灌胃给药具有提高去势小鼠雌激素水平并通过提高阴道上皮角化细胞对雌激素的反应阳性率、提高去势小鼠子宫指数、增加去势小鼠子宫内膜厚度从而表现为雌激素样效应[3]。综上，推测资冲颗粒直肠给药和灌胃给药促进幼龄大鼠卵泡发育可能与提高雌激素水平有关。

　　另外，本实验结果表明，资冲颗粒直肠给药对幼龄大鼠具有一定促进卵泡发育的作用，且其作用效果不亚于灌胃给药。以往应用资冲颗粒灌肠和灌胃对去势小鼠雌激素水平影响的研究结果亦表明,资冲颗粒直肠给药提高去势小鼠雌激素水平和产生雌激素样效应,且其作用效果不亚于灌胃给药[3]。提示补肾中药复方资冲颗粒直肠给药是一条有效的给药途径，且直肠给药不亚于口服。

【参考文献】
  　[1] 乐 杰. 中医妇产科学，第5版[M].北京:人民卫生出版社,2000：22.

　　[2] 曹泽毅.中华妇产科学，上册[M].北京:人民卫生出版社,1999：34.

　　[3] 段 恒,陆 华. 资冲颗粒灌肠和灌胃对去势小鼠雌激素水平的影响[J].北京中医药大学学报,2007,30(3):185.