三种固定液对神经纤维冰冻切片固定效果之比较

【摘要】  目的：观察比较10%甲醛、丙酮和Bouin三种固定液对神经纤维的固定效果，为临床做出更好的神经纤维的快速冰冻切片提供实验基础。方法：取健康大鼠双侧坐骨神经，冰冻切片后分别用三种固定液固定，然后做ＨＥ染色，观察各自的组织结构及染色情况。结果：１０%甲醛固定的神经纤维组织结构较清楚但是组织发生收缩；丙酮固定的神经纤维染色效果较好，组织没有发生收缩；Bouin固定液固定的神经纤维结构和染色都比较好但是组织收缩最明显。结论：三种固定液都可用于固定神经纤维，但丙酮效果最好。职称发表论文

【关键词】  固定液；冰冻切片；HE染色
   
　　Abstract  Objective:To compare the fixation effects of nerve fibers by three fixatives, 10% formaldehyde, acetone, and bouin so as to provide experimental proof for making rapid frozen section of nerve fibers clinically. Methods: Sciatic nerves dissected from healthy rat were subjected to the technique of frozen section and then followed by fixation, and HE staining. The tissue structure of each HE-stained sciatic nerve frozen section was carefully examined. Results: Sciatic nerve frozen section fixed by 10% formaldehyde exhibits relatively clear tissue structure but undergoes tissue structure shrinkage; frozen section fixed by acetone exhibits good staining effect with no tissue structure shrinkage observed; frozen section fixed by bouin exhibits both clear tissue structure and good staining effect yet with the most tissue structure shrinkage. Conclusion: The three fixing agents evaluated here could all be used to fix nerve fiber while apparently acetone provides the best fixing effect.
  
　　Key words  Fixative; Frozen section; HE staining

　　冰冻切片是病理科最常用的快速制片方法之一，它是借助低温使组织达到一定的硬度然后切片的一种方法。由于它不需要经过长时间的固定、包埋和切片后处理等步骤,且能很好的保存组织抗原和酶的活性，因而被广泛应用于临床快速病理诊断[1-2]。但是由于冰冻切片的质量直接影响到病理诊断的快速性和准确性，因此制备高质量的冰冻切片具有重要意义。制备高质量的冰冻切片受多种因素的影响，其中固定液的选择就至关重要。究竟哪种固定液的效果比较好，目前文献中有关报道结果不一[3-4]。我们选用组织学技术中比较常用和容易配置的几种固定液进行比较，行HE染色观察固定效果，以期获得对神经纤维冰冻切片固定效果最好的固定液。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料及仪器  SD大鼠由包头医学院动物室提供。固定液分别为10%甲醛溶液、Bouin固定液、丙酮。Bright 5030轮转式冰冻切片机。

　　1.2  方法  行层次解剖取大鼠坐骨神经，按常规冰冻切片方法，连续切片6张，厚度10μm，分别置于3种固定液中4℃冰箱内固定2分钟，然后入苏木精染液放置5分钟，水洗，再经盐酸酒精分化、氨水返蓝、伊红染液、酒精脱水、二甲苯透明后，用中性树胶封片。
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　　2  结果
  
　　三种固定液的染色效果各有差异，其中丙酮的固定效果最好，组织结构清晰，核着色清楚，核浆对比度好，组织没有发生皱缩，见图1；10%甲醛溶液固定的组织染色效果差，核着色不良，结构模糊，轴突、神经膜等结构不清楚，组织稍有皱缩，见图2；Bouin液固定的组织染色效果较差，组织结构尚可，细胞核、轴突和神经膜清晰可见，但是组织皱缩明显，见图3。

　　图1  丙酮固定：组织结构清晰，核着色清楚，核浆对比度好，组织没有发生皱缩（HE染色，10×40）（略）

　　图2  10%甲醛固定：核着色不良，结构模糊，轴突、神经膜等结构不清，结构稍有皱缩（HE染色，10×40）（略）

　　图3  Bouin液固定：组织结构尚可，细胞核、轴突和神经清晰可见，但是组织皱缩明显。（HE染色，10×40）（略）
3  讨论
  
　　固定的作用在于使蛋白变性、凝固、沉淀，保持细胞、组织原有的形态结构。对于不同的组织需选择不同的固定剂，以期达到最佳效果。甲醛、丙酮、苦味酸对组织均有固定作用，甲醛对组织无明显收缩和膨胀作用,经其短期固定的标本,核染色甚佳，但它不能抵消因冷冻所引起的细胞内液体的肿胀，所以一般来说甲醛固定的组织结构尚完好, 但核发生肿胀、模糊。但本实验并未发现神经细胞核肿胀，估计与不同组织的差异有关；苦味酸对组织的收缩作用显著，这与本实验的结果相同；丙酮为沉淀类固定剂，对组织穿透性强。本实验结果证实丙酮对神经纤维的固定效果是最好的。但也有报道认为混合固定液对冷冻切片HE染色的效果优于单纯固定液[5]。总之，做一张好的冰冻切片需要丰富的经验和高超的技术，具体应用哪种固定液需要根据组织的特性和实验条件灵活选择。

【参考文献】
  　　[1] 胡孟钧.1058例冰冻切片分析[J].浙江临床医学,2001,3（2）:105.
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　　[2] 杜文越.冰冻切片技术在病理诊断重的应用[J].河北医学,2001,8（11）:1022-1024.

　　[3] 王正义,柏戒,王亚平.固定液对恒冷箱切片组织结构与染色效果的比较[J].重庆医科大学学报,1999,24(1):64-67.

　　[4] 孙和国,何毅民,孙莉,等.三种固定液对冷冻组织切片固定效果的比较[J].诊断病理学杂志,2001,8(2):114.

　　[5] 高美钦,黄雄飞,肖志芸,等.不同固定液对冷冻切片HE染色影响的比较[J].福建医科大学学报,2001,35(4):367

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