护肝宝对四氯化碳急性肝损伤大鼠肝胆转运功能的影响
【摘要】 目的研究中药组方护肝宝对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤大鼠的靛氰绿(ICG)肝清除率的影响。方法将32只大鼠随机分为空白对照组、模型组和护肝宝高、低剂量组，每组8只。用CCl4制作大鼠急性肝损伤模型，测定下列变化：①大鼠血清天冬氨酸转氨酶(ALT)、丙氨酸转氨酶(AST);②肝脏形态学的改变;③肝血流量和靛氰绿肝清除率的改变;观察护肝宝对CCl4大鼠急性肝损伤的影响。结果护肝宝能明显抑制CCl4所致大鼠血清中ALT及AST含量的升高(P < 0.05或P < 0.01)，改善肝脏组织病理，对抗CCl4所致肝血流量和肝清除率下降(P < 0.05)。 结论护肝宝可保护肝脏，对抗CCl4所致肝清除率和肝血流量下降。
【关键词】 护肝宝; 四氯化碳; 靛氰绿; 肝清除率
肝脏是药物消除的重要器官。有研究结果表明[1，2]，四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤可造成肝胆转运系统的损害，影响染料指示剂靛氰绿(Indocyanine green，ICG)在肝胆内的转运过程，但目前关于肝病治疗药物对这一转运过程的影响尚未见报道。中药复方制剂护肝宝是我课题组自行研究的一种中药复方制剂，由黄芪、丹参、虎杖等药物组成，具有益气活血、舒肝利胆、清热解毒、燥湿利湿等作用，临床治疗急性肝炎取得了良好的疗效。本实验研究了护肝宝对CCl4所致急性肝损伤大鼠肝脏对ICG清除的影响。结果如下。
1 材料
雄性Wistar大鼠，体质量220～250 g，由河北医科大学动物学部提供。动物分组：将大鼠随机分为空白对照组，CCl4急性肝损伤病理模型组、护肝宝高剂量组(80 g生药/kg·d)和低剂量组(40 g生药/kg·d)，每组8只。高、低剂量组连续灌胃给药7d，1次/d;空白对照组、病理模型组灌等量生理盐水。灌胃第7日时，给模型组、护肝宝大、小剂量给药组大鼠灌胃(ig)1次给予体积分数为50%的CCl4溶液2 ml/kg，对照组ig给予等量生理盐水，24 h后进行实验。主要试剂：ICG，比利时ACROS公司生产;CCl4，北京化学试剂厂生产。
2 方法
2.1 观察指标及方法
2.1.1 血液生化检测测定指标包括丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)。
2.1.2 肝脏组织学检查取动物肝脏，甲醛固定，石蜡包埋，切片染色，进行组织学观察。
2.1.3 肝血流量及肝脏清除率测定[2]大鼠颈静脉连续注入ICG，采取改良的简易肝血流量测定法测定肝血流量及ICG肝清除率,具体方法如下：①肝静脉和股动脉插管分别收集血液标本;②股静脉插管以进行ICG的连续注入：采用微量自动注入泵,注入速度为119 μmol/h。第30和40分钟时分别自股动脉收集0.2 ml的股动脉血，第35和40分钟时分别自肝静脉收集0.2 ml的肝静脉血，所收集血浆经11倍稀释后用红外光谱测定仪测定805～800 nm处ICG吸收峰值， 根据标准曲线计算浓度，再根据下列计算公式计算肝血流量和ICG肝清除率：
肝血流量 = I/Cpa-CPv;ICG肝清除率 = I/CPa
上式中I：ICG注入速度;Cpa：ICG动脉血中浓度;CPv：ICG肝静脉血中浓度。
2.2 统计学处理所有数据用±s表示，应用SPSS10.0统计软件进行方差分析。
3 结果 3.1 护肝宝对ALT及AST含量的影响护肝宝明显抑制CCl4所致急性肝损伤大鼠血清中ALT及AST含量的升高(P <0.05，P< 0.01)。结果见表1。表1 护肝宝对急性肝损伤大鼠血清ALT，AST的影响与模型组比较, *P< 0.05，**P< 0.01，***P< 0.001;n=8 3.2 护肝宝对肝脏组织学影响光镜观察可见CCl4肝损伤大鼠肝细胞排列紊乱，炎细胞浸润，肝细胞空泡变性，胞浆疏松化、气球样变和肝细胞浊肿。由于肝细胞变性坏死，所剩细胞减少，被扩张的肝窦所取代而出现肝窦变宽。还可见中心静脉区域损害程度远甚于门脉区域。护肝宝能减轻肝细胞肿胀、肝组织坏死、炎性细胞浸润等病理学变化(P< 0.05，P< 0.01)，结果见表2。3.3 护肝宝对肝血流量及ICG肝脏清除率的影响CCl4肝损伤大鼠肝血流明显减慢(P< 0.05)，ICG肝脏清除率明显下降(P < 0.01)。结果见表3。表2 护肝宝对各组动物肝组织病理变化的影响例表3 护肝宝对急性肝损伤大鼠肝血流量和ICG肝清除率的影响 4 讨论 影响ICG在血浆中消除的主要原因是肝血流量、有功能肝细胞总数、胆汁排泄和胆道畅通的程度等因素。近期有研究结果显示[2]，CCl4所致急性肝损伤可引起肝细胞显著破坏，肝血流量减少，引起肝胆转运系统损害，影响ICG自血液进入肝细胞，导致肝脏清除ICG功能减退。护肝宝由黄芪、丹参、虎杖、柴胡、黄芩、龙胆草等中药组成，方中虎杖利胆活血，清热解毒;黄芪、丹参益气活血;龙胆草苦寒泻火解毒;黄芩、栀子清热解毒，泻火燥湿，诸药合用，共奏益气活血、舒肝利胆、清热解毒、燥湿利湿之功效。单味药的研究结果表明[3，4]，黄芪对于小鼠急性中毒性肝炎模型有保护肝脏，防止肝糖原减少的作用。组织化学法检查肝脏可见糖原增加，溶酶体及组织脱酶体活跃。具有很好的调节免疫功能的作用和一定的抗病毒作用。黄芪对不同类型的急慢性肝炎的作用也有报道，其疏肝作用在临床上有广泛的实用价值。丹参有改善微循环障碍、改变血液流变、抗凝血、抗炎、耐缺氧、提高免疫功能、抗肿瘤活性等多种药理作用;临床研究表明，丹参对急慢性肝病确有疗效，具有良好的护肝降酶，软缩肝脾，改善血清蛋白含量，提高免疫功能，促进纤维吸收，对慢性肝炎转化为肝硬化起延缓与阻断作用。丹参可明显改变临床症状、黄疸指数(TBil)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)，为治疗急慢性肝炎的有效药物。 本实验结果表明，护肝宝能对抗CCl4所致肝血流量和肝清除率下降，使肝胆转运功能改善，此作用可能与护肝宝明显抑制CCl4所致急性肝损伤大鼠血清中ALT及AST含量的升高，减轻肝细胞的变性、坏死等病理学改变以及促进大鼠的胆汁分泌有关，详细机理有待进一步探讨。 【参考文献】
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